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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关抑菌圈试验中菌种的浓度问题！
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frank345

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】有关抑菌圈试验中菌种的浓度问题！ 已有22人参与

请教大家：我现在做抑菌圈试验，看有的文献上说，菌种活化后，要配菌悬液啥

的，比如用生理盐水配成含菌数105  -106/ml的菌悬液怎么配呢？是不是通过浊度

和含菌量有一定的换算关系？有没有简单易行的方法呢？急啊，谢谢大家了。
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1楼 2010-04-08 15:45:06
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名字有点长

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by taiji2002 at 2010-05-21 10:24:34
你可以测一下OD值和细菌个数之间的关系，每次只要测一下OD就行啦，比较简单

OD值是多少
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23楼2013-06-22 21:55:42
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unameder

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
frank345(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 18:52
你用什么菌啊，曾经用显微镜直接计数过，效果尚可。比较准的是梯度稀释涂布、倾倒吧，不过比较费时间，还是提前确定生长曲线什么的，确定培养条件如温度转速收菌时间，以后就用同样的方法。如果要求较严格，那就像你所说的，先确定浊度和菌密度的关系，每次用时测定浊度，查出菌密度，稀释到目标浓度。
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2楼2010-04-08 16:12:18
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yushanyou12

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
frank345(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 18:52
小木虫: 金币+2, 帖子真精彩 2014-06-05 09:56:27
有成熟的方法，举例说明，如下
我以前做阳性对照试验，使用的是金葡菌和大肠杆菌。就是先把金葡菌和大肠杆菌的菌种都先用营养肉汤培养一天，这里里面的活性菌的量会达到一个动态平衡，就是不断的生长和死亡。之后吸取1ML该培养液到100ml生理盐水中，制成很浓的菌悬液。再然后就对该浓菌液进行10倍递增稀释，一般稀释到10-7到-8次就是每毫升100cfu左右的菌悬液了。
至于菌液的稀释方法应该是要自己掌握的，那就是手感还与你的培养基培养温度，菌种有关。建议进行几次菌液稀释的平行实验并增强熟练度。掌握一个大概需要稀释到几次方。然后以后在真正做实验的时候，一般是实验和平板计数同时进行的，实验结果出来了，平板计数的结果也就出来了。在根据平板计数的结果来计算抑菌的效果。
另外这个方法还有一个好处就是，配置的弄菌悬液是可以在4度左右的温度下保存一周的，每次使用时每次稀释并计数。不用每次都去培养，但是越到后面效果就越差，也就是活性菌的量越小，稀释的倍数也就要相应减小。低浓度的菌液是不能保存的，只能当天使用。
呵呵，我这个方法是在药厂做阳性对照试验时用的，也用于药物的抑菌验证，也就是限度实验方法验证。你自己做实验用的话，因为菌种的不同及其他的因素，你是要自己先做验证实验的，菌种的培养基也根据你的菌种要求选择，当然验证实验无论什么时候也都是必须的。该方法颇为有效，可做参考 。
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今夜的寂寞，让我如此美丽。
3楼2010-04-08 16:14:38
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zhaolw

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
frank345(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 18:52
你可以将菌种活化后，挑去单菌落到液体培养基中培养，如果是普通的哺乳动物的菌一般不要超过24h，如果有恒温摇床时间要适当缩短，浓度就能达到9-10次方。将菌液进行计数，可以才用浊度计进行计数，或者用比浊管，如果没有上述工具可以进行梯度稀释，之后可以用血球计数板在显微镜下计数，或者进行平板涂布，进行平板计数。确定数量级后，可以采用培养液或者生理盐水将菌液稀释到你所需要的浓度。
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4楼2010-04-08 16:43:06
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