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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】实时定量PCR求助
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fykxy_206

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】实时定量PCR求助 已有3人参与

我想确定真菌目的基因的mRNA表达量，如果用实时定量PCR来做可以吗？

我现在目的基因特异性的引物，有One Step SYBR® PrimeScript® RT-PCR Kit（DRR066A）这个试剂盒，我还需要用一个内标基因吗？也就是我是不是还要准备一个内标基因的引物？


还需要别的什么东西吗？


急问，金币不是问题！希望有高手指点指点。
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1楼 2010-04-07 13:29:28
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silicare

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优秀版主
fykxy_206(金币+1):4 2010-04-09 14:44
可以
内参是要的
别的不说，万一你的rna降解了呢，当然要内参看一下了
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2楼2010-04-07 14:18:18
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zzw1221

木虫 (著名写手)
fykxy_206(金币+5): 2010-04-09 14:44
内标是必须的，另外实时定量前最好在普通的pcr仪上摸索你的内标和目的检测片段的pcr条件，主要是退火温度，才能上定量pcr 仪跑。
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3楼2010-04-07 14:42:13
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
fykxy_206(金币+6): 2010-04-09 14:43
楼主这个盒子使用染料法和探针法都是可以的吧，用染料法只设计引物就可以了，内参是相对定量必须的，现在一般都是使用相对定量法来做的，所以还是需要内参的，如果想实验更严格，想发高水平的论文，那么事实上，一个内参得出的结论是不够可靠的，最好是两个内参，要求两个内参的定量结果较一致。
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4楼2010-04-07 15:40:06
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