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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR
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xtaqo045

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR 已有5人参与

请问：PCR产物有很多杂带，若以此产物代替DNA模板再PCR得到的二次产物切胶回收后能用于T-载体连接吗？这样会影响连接的效果吗？影响后期的测序结果吗？
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1楼 2010-04-04 16:23:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-04 19:39
xtaqo045(金币+2): 2010-04-04 20:03
xtaqo045(金币+1): 2010-05-04 20:54:47
要做巢式PCR，不建议用同样的引物再做，除非切胶
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2楼2010-04-04 16:28:18
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-04 19:40
二次PCR可以的，但是可能错配的机率有所提高，但是有些时候是没有办法的办法
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3楼2010-04-04 16:52:16
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
1949stone(金币+1): 2010-04-04 19:40
建议把第一次pcr产物跑电泳后，把目的条带左右的胶切下来，-20冻一下，离心一下，把离心下来的液体做模板做pcr
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-04 18:00:43
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j2

木虫 (正式写手)
xtaqo045(金币+1): 2010-05-04 20:55:39
最好不要做2次PCR，错配几率高，直接用DNA为模板PCR后胶回收一样啊
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2010-04-04 19:49:56
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

分析一下你的原因

★
scelab(金币+1): 2010-04-04 20:58
xtaqo045(金币+1): 2010-05-04 20:55:30
既然是PCR杂带怎么会那么多条呢，你如何设计的引物。要是引物专一性好，不会出现这种情况。再不然根据你的需要你可以再一个特定的bp段 把胶给切下来。单独回收，再重新PCR，别的方法看样子不好实现，要是重新设计引物来不及了吧。
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6楼2010-04-04 19:59:03
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