24小时热门版块排行榜    

查看: 508  |  回复: 5
当前主题已经存档。

xtaqo045

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR 已有5人参与

请问:PCR产物有很多杂带,若以此产物代替DNA模板再PCR得到的二次产物切胶回收后能用于T-载体连接吗?这样会影响连接的效果吗?影响后期的测序结果吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


1949stone(金币+1): 2010-04-04 19:39
xtaqo045(金币+2): 2010-04-04 20:03
xtaqo045(金币+1): 2010-05-04 20:54:47
要做巢式PCR,不建议用同样的引物再做,除非切胶
2楼2010-04-04 16:28:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


1949stone(金币+1): 2010-04-04 19:40
二次PCR可以的,但是可能错配的机率有所提高,但是有些时候是没有办法的办法
3楼2010-04-04 16:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


1949stone(金币+1): 2010-04-04 19:40
建议把第一次pcr产物跑电泳后,把目的条带左右的胶切下来,-20冻一下,离心一下,把离心下来的液体做模板做pcr
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-04 18:00:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)

xtaqo045(金币+1): 2010-05-04 20:55:39
最好不要做2次PCR,错配几率高,直接用DNA为模板PCR后胶回收一样啊
修炼ing,当虫仙……
5楼2010-04-04 19:49:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqk198738

金虫 (正式写手)

分析一下你的原因


scelab(金币+1): 2010-04-04 20:58
xtaqo045(金币+1): 2010-05-04 20:55:30
既然是PCR杂带怎么会那么多条呢,你如何设计的引物。要是引物专一性好,不会出现这种情况。再不然根据你的需要你可以再一个特定的bp段 把胶给切下来。单独回收,再重新PCR,别的方法看样子不好实现,要是重新设计引物来不及了吧。
6楼2010-04-04 19:59:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xtaqo045 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +6 嘉年新程 2026-03-15 6/300 2026-03-21 17:07 by Dream007008
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 材料工程(专)一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
信息提示
请填处理意见