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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RT-PCR结果分析
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by pidou at 2010-04-05 00:41:20:
我的引物是别人用过的了，是简并行引物，这个我觉得应该不会有什么影响吧？？


如果是简并引物，你应该根据简并度，适当增加引物用量，照你现在的说法，我觉得增加了引物用量，你的扩增应该会强一些，但是明显看到好像还有引物二聚体，所以也很难说，试试吧，降低退火温度也试试

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-4-6 at 17:42 ]
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11楼2010-04-06 17:40:51
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sn198651

银虫 (初入文坛)
pidou(金币+1):请问一下，阴阳对照怎么做？能否再麻烦一下，谢谢 2010-04-06 21:11
按照我们这边的话 这个算是失败的
一般你做个阴阳性对照 一起来做
如果你的阳性对照要是很亮的话就不是引物问题 而是样品的问题
如果阳性对照依然不清晰的话最好换个引物看看把
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12楼2010-04-06 18:10:41
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DNAhelix

银虫 (著名写手)
pidou(金币+1):谢谢你的回复，但是假如我的cDNA质量是不变的，请问如何才能增加PCR的产量？或者说cDNA的质量影响有多大？ 2010-04-06 17:12

回复楼主：
增加循环数，增加cDNA模板的体积。

至于cDNA的质量影响有多大，看降解程度及RNA的纯度而定吧。
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智慧活法：不生气，不计较！
13楼2010-04-06 18:13:48
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sn198651

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-09 12:37
可以这样说你找个已知同类型的阳性样品做阳性对照
用dd水或DEPC水做为阴性对照
和你的样品一起做RT-PCR
当然最好还是用带滤芯的枪头更好些

不知道你的RT-PCR的样品是一次提多少的
我这边一般阴性阳性和样品每个都用200微升
很少出现这么弱的
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14楼2010-04-09 08:21:55
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pidou

木虫 (正式写手)
200ul?????



这么多啊？？
带滤芯的枪头？？为什么呢？
引用回帖:
Originally posted by sn198651 at 2010-04-09 08:21:55:
可以这样说你找个已知同类型的阳性样品做阳性对照
用dd水或DEPC水做为阴性对照
和你的样品一起做RT-PCR
当然最好还是用带滤芯的枪头更好些

不知道你的RT-PCR的样品是一次提多少的
我这边一般阴性阳性和样品 ...

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15楼2010-04-11 00:25:51
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bioplant

木虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-11 10:38
兼并引物扩增出多条片段是常见的，可以设计巢式引物，以第一次PCR的产物为模板扩增，往往得到一条带啦。
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16楼2010-04-11 08:07:38
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