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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by pidou at 2010-04-05 00:41:20:
我的引物是别人用过的了,是简并行引物,这个我觉得应该不会有什么影响吧??


如果是简并引物,你应该根据简并度,适当增加引物用量,照你现在的说法,我觉得增加了引物用量,你的扩增应该会强一些,但是明显看到好像还有引物二聚体,所以也很难说,试试吧,降低退火温度也试试

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-4-6 at 17:42 ]
11楼2010-04-06 17:40:51
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sn198651

银虫 (初入文坛)

pidou(金币+1):请问一下,阴阳对照怎么做?能否再麻烦一下,谢谢 2010-04-06 21:11
按照我们这边的话 这个算是失败的
一般你做个阴阳性对照 一起来做
如果你的阳性对照要是很亮的话就不是引物问题 而是样品的问题
如果阳性对照依然不清晰的话最好换个引物看看把
12楼2010-04-06 18:10:41
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DNAhelix

银虫 (著名写手)

pidou(金币+1):谢谢你的回复,但是假如我的cDNA质量是不变的,请问如何才能增加PCR的产量?或者说cDNA的质量影响有多大? 2010-04-06 17:12

回复楼主:
增加循环数,增加cDNA模板的体积。

至于cDNA的质量影响有多大,看降解程度及RNA的纯度而定吧。
智慧活法:不生气,不计较!
13楼2010-04-06 18:13:48
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sn198651

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-09 12:37
可以这样说你找个已知同类型的阳性样品做阳性对照
用dd水或DEPC水做为阴性对照
和你的样品一起做RT-PCR
当然最好还是用带滤芯的枪头更好些

不知道你的RT-PCR的样品是一次提多少的
我这边一般阴性阳性和样品每个都用200微升
很少出现这么弱的
14楼2010-04-09 08:21:55
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pidou

木虫 (正式写手)

200ul?????



这么多啊??
带滤芯的枪头??为什么呢?
引用回帖:
Originally posted by sn198651 at 2010-04-09 08:21:55:
可以这样说你找个已知同类型的阳性样品做阳性对照
用dd水或DEPC水做为阴性对照
和你的样品一起做RT-PCR
当然最好还是用带滤芯的枪头更好些

不知道你的RT-PCR的样品是一次提多少的
我这边一般阴性阳性和样品 ...

15楼2010-04-11 00:25:51
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bioplant

木虫 (正式写手)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-11 10:38
兼并引物扩增出多条片段是常见的,可以设计巢式引物,以第一次PCR的产物为模板扩增,往往得到一条带啦。
16楼2010-04-11 08:07:38
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