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linyuxiang01

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】有关激酶实验的方法和问题 已有2人参与

药理学菜鸟想请教一下关于激酶的实验,

现有一合成药物,通过kinases assays kits 发现,药物可以与几个不同的激酶有结合,我们预测药物可能是激酶的抑制剂,想请教一下如果化合物是激酶的抑制剂,通过基因工程验证的时候是应该采取基因敲除的方法knock down 激酶相关基因,检测药物作用效果减弱,还是应该过表达相关基因,药物作用发现IC50有变化,哪一种方法比较靠谱呢?

跪求高人指点,

[ Last edited by linyuxiang01 on 2010-4-3 at 09:56 ]
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tjegg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-04-03 19:53
linyuxiang01(金币+1): 2010-04-03 21:57
把这个激酶表达出来蛋白,然后用ELISA测定是否有剂量依赖性。或者用不同化合物作用在高表达这个激酶的细胞,免疫共沉淀和使用相应的抗体做WB来看剂量依赖性,就可以判断了,很eazy。想复杂的话,可用蛋白相互作用仪,测定小分子与激酶蛋白的亲和力。。。不细说了,你也不说你的什么激酶,也不知你听懂没有?但愿不是对牛弹琴。
除了你的亲人,没有人应该对你好,对你好的人,一定要珍惜。
2楼2010-04-03 18:49:16
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linyuxiang01

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by tjegg at 2010-04-03 18:49:16:
把这个激酶表达出来蛋白,然后用ELISA测定是否有剂量依赖性。或者用不同化合物作用在高表达这个激酶的细胞,免疫共沉淀和使用相应的抗体做WB来看剂量依赖性,就可以判断了,很eazy。想复杂的话,可用蛋白相互作用 ...

谢谢您,能否私下交流呢?加我Q383257316
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3楼2010-04-03 21:59:15
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