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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】化转连接体系
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】化转连接体系

DH5α化转了3次连接体系（目的片段+T载体）每次抗性平板上都长有菌落，只是第一天是很小的单菌落，第二天就长成了一坨……（如下图），为什么呐……请问化转有什么要注意的？是不是我涂板有问题？

是不是要做个镜检看看是不是染菌了呐？我用的EP管是从外面拿的 是不是染菌了呐？

[ Last edited by wwdxx2004 on 2010-4-1 at 10:52 ]
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1楼 2010-03-31 19:08:34
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shwjs88 at 2010-04-01 14:17:50:
你好，我做过的与T载体相连转化后一般过夜培养就可以了，然后挑单菌落做菌落PCR验证，培养不超过16小时，时间长了质粒会排出，同时菌生长成卫星菌落时，会形成AMP空白区。

谢谢了！！！！！下次我做一个对照
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5楼2010-04-01 16:18:06
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
wwdxx2004(金币+2):谢谢了 2010-03-31 22:35
　有些载体带有β-内酰胺酶的基因，表达出β-内酰胺酶，它可以破坏氨卞青霉素。当细菌培养时间过长，β-内酰胺酶积累过多，就会使氨卞青霉素失效，导致不含质粒的空菌落大量生长，这就是卫星菌落。
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2楼2010-03-31 21:50:31
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2010-03-31 21:50:31:
　有些载体带有β-内酰胺酶的基因，表达出β-内酰胺酶，它可以破坏氨卞青霉素。当细菌培养时间过长，β-内酰胺酶积累过多，就会使氨卞青霉素失效，导致不含质粒的空菌落大量生长，这就是卫星菌落。

你好 我是把tKtA基因连在了T载体上 T载体上应该没有β-内酰胺酶吧……谢谢了……

[ Last edited by wwdxx2004 on 2010-3-31 at 22:44 ]
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3楼2010-03-31 22:36:58
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shwjs88

银虫 (小有名气)
★
wwdxx2004(金币+1):谢谢参与
wwdxx2004(金币+3):谢谢了！！！ 2010-04-01 16:33
你好，我做过的与T载体相连转化后一般过夜培养就可以了，然后挑单菌落做菌落PCR验证，培养不超过16小时，时间长了质粒会排出，同时菌生长成卫星菌落时，会形成AMP空白区。
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4楼2010-04-01 14:17:50
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