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小鼠的饲养与管理
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包括小鼠的生物习性、主要用途、饲养与管理、品种品系以及常见疾病。 第六章 小鼠的饲养与管理 小鼠（Mouse. Mus. musculus）属哺乳纲（Mammalia）、啮齿目（Rodentia）、鼠科（Muridae）、小鼠属（Mus）。小鼠来源于野生鼷鼠，从17世纪开始用于解剖学研究及动物实验，经长期人工饲养选择培育，已育成多达千余个独立的远交群和近交系，分布遍及世界各地。由于小鼠繁殖快，饲养管理费用低，所以成为生物医学研究中广泛使用的实验动物，也是当今世界上研究最详尽的哺乳类实验动物。 第一节 生物学特性 一、行为和习性 1. 小鼠胆小，易于受惊，对外界环境的改变反应敏感。受惊时,尾巴挺直并猛力甩动，如强光或噪声刺激可导致哺乳母鼠神经紊乱，发生食仔现象。 2. 小鼠在人工驯养条件下,性情温顺易于捕捉，一旦逃出笼外过夜则恢复野性，行动敏捷难以捕捉。 3. 小鼠喜欢阴暗，固定一处睡眠营巢。傍晚活动加强，夜间更加活跃， 其进食、交配、分娩多发生在夜间。 4. 小鼠是典型的啮齿动物，门齿终生生长。因此小鼠有啃咬习惯， 以此来磨损门齿并保持其长短的恒定。 5. 小鼠为群居动物，当群饲时，其饲料消耗量比单个饲养时多，生长发育也快。 6. 小鼠群体中性成熟的雄鼠放在一起易发生互斗。 源于一窝的雄鼠或断奶后同笼饲养的雄鼠间则较少攻击。外来雄鼠常招致几只雄鼠的集体攻击。群居优势在雄性很明显，表现为群体中处于优势者保留胡须,被称为“理发师”,而处于劣势者胡须被拔光。这一现象应与因寄生虫性或真菌性皮炎所致的掉毛相区别。 雄鼠具有分泌醋酸胺臭气的特性，是小鼠饲养室内特异臭气的主要原因。 7. 小鼠对外界温度的变化特别是低温非常敏感，由于运输、 环境改变而致低温可很快引起小鼠死亡。 二、解剖学特点 1. 外观 小鼠体形小，90日龄的昆明种小鼠体长为90～110mm，体重为35～55g 。 近交系如615小鼠体长为85～94mm，体重为24～35g。一般雄鼠大于雌鼠。 嘴尖，头呈锥体形，嘴脸前部两侧有触须，耳耸立呈半圆形。 尾长约与体长相等，成年鼠尾长约150mm。尾有四条明显的血管,背腹面各有一条静脉，两侧各有一条动脉。尾有平衡、散热和自卫等功能。 被毛颜色有白色、野生色、黑色、肉桂色、褐色、白斑等。健康小鼠被毛光滑紧贴体表，四肢匀称，眼睛亮而有神。 2. 骨骼系统 小鼠上下颌各有两个门齿和六个臼齿，齿式为2（1003／1003）=16。门齿终生不断生长。下颌骨喙状突较小，髁状突发达，其形态有品系特征，可采用下颌骨形态分析技术进行近交系小鼠遗传质量的监测。 小鼠的脊椎由55～61个脊椎骨组成，包括颈椎7个、胸椎12～14个、腰椎5～6 个、荐椎4个、尾椎27～30个。肋骨有12～14对，其中7对与胸骨接连，其它5～7对呈游离状态,胸骨6块。前肢由肩胛骨、锁骨、肱骨（上腕骨）、桡骨、尺骨、腕骨和指骨组成。后肢由髋骨、大腿骨、胫骨、腓骨、跗骨、趾骨组成。 小鼠骨髓为红髓，终身造血。 3. 内部脏器 胸腔内有气管、肺、心脏和胸腺，心尖位于第4肋间。肺由4叶组成。 腹腔内有肝脏、胆囊、胃、肠、肾、膀胱、脾等器官。 小鼠为杂食动物。食道细长约2cm,胃分前胃和腺胃，有嵴分隔，前胃为食管的延伸膨大部分。胃容量小（1.0～1.5ml），功能较差，不耐饥饿。与豚鼠、家兔等草食性动物相比，肠道较短，盲肠不发达，肠内能合成维生素C。有胆囊。胰腺分散在十二指肠、胃底及脾门处，色淡红，不规则，似脂肪组织。肝脏是腹腔内最大的脏器，分左、右、中、尾四叶组成，具有分泌胆汁，调节血糖，贮存肝糖和血液，形成尿素，中和有毒物质等功能。 4. 淋巴系统 淋巴系统很发达，包括淋巴管、淋巴结、胸腺、脾脏、外周淋巴结以及肠道派伊尔氏淋巴集结。性成熟时胸腺最大。脾脏可贮存血液并含有造血细胞，包括巨核细胞、原始造血细胞等，这些造血细胞组成造血灶，有造血功能。雄鼠脾脏明显大于雌鼠。小鼠没有腭或咽扁桃体。外来刺激可使淋巴系统增生。 5. 生殖系统 雌鼠的生殖器官有卵巢、输卵管、子宫、阴道、阴蒂腺、乳腺等。雌性子宫呈 "Y"型，分为子宫角、子宫体、子宫颈。卵巢为系膜包绕，不与腹腔相通，故无宫外孕。阴蒂腺在阴蒂处开口，左右各一。阴道在出生时关闭，从断奶后至性成熟才慢慢张开。乳腺发达，共有5对，3对位于胸部，可延伸至颈部和背部；腹部有2对，延续到鼠蹊部、会阴部和腹部两侧，并与胸部乳腺相连。 雄鼠的生殖器官有睾丸、附睾、储精囊、副性腺（凝固腺、前列腺、尿道球腺、包皮腺）、输精管及阴茎等。雄性为双睾丸，幼年时藏存于腹腔内，性成熟后则下降到阴囊，其表面为纤维结缔组织，内部有许多曲细精管和间质组织所组成。精子在通过附睾期间成熟，并与副性腺分泌物一同在交配时射入雌鼠阴道内。前列腺分背、腹两叶。凝固腺附着于精液腺内侧，是呈半透明的半月形器官。副性腺分泌物有营养精子、形成阴道栓等作用。 三、生理学特性 1. 生长发育 小鼠生长发育的快慢与品系、营养状况、健康状况、环境条件、母鼠哺乳只数和哺乳能力以及生产胎次均有密切关系。 小鼠卵在输卵管壶腹部受精后开始分裂发育,至桑椹胚（约3天）进入子宫，形成囊胚（约第5 天）开始着床，妊娠期为19～21天。 胎儿产出后母鼠撕破羊膜，咬断脐带，吃掉胎盘。新生小鼠赤裸无毛,皮肤肉红色,不开眼，双耳与皮肤粘连。初生小鼠即可发声，嗅觉和味觉敏感。3日龄仔鼠脐带脱落,皮肤由红转为白色，开始长毛并出现胡须，有色品系仔鼠可看出毛色。4～6日龄双耳张开耸立。7～8日龄四肢发育开始爬动游走，被毛逐渐浓密，下门齿长出。9～10 日龄有听觉，被毛长齐。12～14日龄睁眼，长出上门齿，开始采食及饮水。3 周龄可离乳独立生活。4周龄，雌鼠阴腔张开。5周龄，雄鼠睾丸降落至阴囊，开始生成精子。60日龄体成熟。健康小鼠寿命可达18～24个月，最长可达3年。近交系小鼠与普通小鼠相比,一般生活能力弱，寿命较短。 就动物体重与年龄（日龄或周龄）的相关关系可以画出动物的生长曲线。也可按体重和年龄数据列出其体重增长情况表。生长曲线和体重增长情况表是动物饲养管理和健康状况多种因素综合性评价的重要指标。一般雄鼠比雌鼠体重增长快。普通小鼠比近交系小鼠生长快。（见表1） 表1 不同周龄小鼠体重的增长情况 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 品(种)系 昆明小鼠 615小鼠 C3H小鼠 ──────────────────────── 周 龄 ♂ ♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 初生 1.90 1.70 1.58 1.58 1.44 1.44 1 6.40 5.70 4.64 4.64 4.40 4.40 2 9.77 8.35 7.96 7.96 7.00 7.00 3 12.70 12.50 9.83 9.83 9.70 9.70 4 20.00 17.50 19.00 15.75 13.30 12.10 5 29.50 24.00 22.58 20.75 17.20 15.20 6 32.50 28.50 25.96 21.88 20.00 17.80 7 36.00 30.00 27.96 23.12 21.20 18.00 8 38.00 33.00 28.83 24.16 22.30 19.27 9 40.00 34.00 28.88 24.80 25.30 20.85 10 41.00 35.00 29.79 25.28 25.80 22.10 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 2. 体温与水的调节 小鼠的体温调节因日龄的增长而不同。新生小鼠在40日龄前其体温是被动调节的，特别是新生乳鼠，在被毛长齐以前，主要依靠母鼠维持体温。40日龄后,体温自动调节,正常情况下保持恒定。 小鼠体表面积相对较大，环境温度的波动常可引起小鼠发生明显的生理学反应。小鼠对寒冷的应答反应为不发抖产热作用。寒冷静态下小鼠产生的热量相当于基础代谢率的3倍，比任何其它动物的变化都大。小鼠汗腺不发达，不能加大喘气，唾液分泌能力有限。在运输途中或实验室内如环境温度升高则以体温升高，代谢率下降以及耳血管扩张来加快散热。 外界温度变化太大,可很快使小鼠丧失体温的恒定性。低温能造成小鼠繁殖力下降,抗病力下降，短时间内可导致小鼠死亡。持续高温（32℃以上）也常常引起小鼠死亡。研究发现小鼠在21～25℃环境温度区内生长较快，产仔多，活力强。 小鼠可通过呼出的气体在鼻腔内冷却以及尿液的高度浓缩来保持水分。与大多数哺乳动物相比小鼠对饮水量不足更为敏感，因为小鼠水分代谢的半衰期仅为1.1天,比大的哺乳动物要快得多，因此，对小鼠需要供给充足的饮水。小鼠饮水量为4～7ml／天。环境温度、湿度变化太大时，都会影响小鼠健康，而发生疾病。 3. 正常生理生化常数 （1）一般生理值 体重：近交系成年小鼠24～35g；昆明成年小鼠35～55g 寿命：2～3年 妊娠期：19～21天 性周期：4～5天 心率：600（328～780）次／分 呼吸量：0.09～0.23ml／次 饮水要求量：4～7ml／只／天 排尿量：1～3ml／天 体成熟：60～90天 哺乳期：18～23天 体温：37.5～38.8℃ 呼吸数：163（84～230）次／分 饲料要求量：3～7g／只／天 排便量：1.4～2.8g／天 （2）血液指数 血压：95～125／67～90mmHg 总血量：7.78（4.9～12.1）ml／100g体重 红细胞：9.3（7.7～12.5）×106／mm3血 红细胞压积：41.5ml／dl血 血红蛋白浓度：14.8（10～19）g／dl血，32（30～35）g／dl红细胞 白细胞：8.0（4.0～12.0）千／mm3血 嗜中性白细胞：25.5（12～44）％，2.0（0.7～4.0）千／mm3血 嗜酸性白细胞：2（0～5）％，0.15（0～0.5）千／mm3血 嗜碱性白细胞：0.5（0～1）％，0.05（0～0.1）千／mm3血 单核细胞：4（0～15）％，0.3（0～1.3）千／mm3血 淋巴细胞：68（54～85）％，5.5（3～8.5）千／mm3血 血小板：157～260千／mm3血 （3）血液生化指标 血浆总蛋白：5.5（5.2～5.7）g／dl 白蛋白：3.2（2.8～3.9）g／dl 球蛋白：3.8（3.5～4.1）g／dl 钙：9.8～10.6mg／dl 钠：335～370mg／dl 清蛋白：1.6～1.7g／dl 全血糖：147～171mg／dl 钾：30～31mg／dl 四、生殖生理 1. 性成熟 小鼠性成熟早，5周龄雄鼠睾丸出现精子，45～60日龄性发育成熟。雌鼠20 日龄后阴道皮肤逐渐变薄，阴道开口，其阴道开口与卵巢机能活动相一致。一般雌鼠36～50日龄，具有生殖能力。小鼠的性成熟因品系和饲养条件不同而有所差异。 2. 发情 雌鼠性成熟后，象其它哺乳动物一样，卵巢间断而周期性的产生卵细胞并分泌雌性激素，包括卵细胞上皮细胞分泌的雌激素和黄体细胞分泌的孕激素。在激素的作用下雌鼠出现明显的动情周期称为性周期。雌鼠全年多次发情，性周期4～5天。 性周期可分为动情前期,发情期,动情后期,动情间期（休情期）4个阶段。每个阶段的阴道粘膜可发生典型变化。根据阴道涂片所观察到的阴道上皮细胞变化，可进一步推测卵巢、子宫功能的周期性变化及激素变化和所处的发情阶段。如在发情期可观察到大量的角化上皮细胞集聚在一起；而在发情间期可观察到散在的白细胞、有核上皮细胞、少量角化上皮细胞及少量粘液。 3. 交配 小鼠体成熟一般多为60～90天,是适宜的配种日龄。一般发情后2～3小时即可排卵,排卵期3～4天，但在排卵期仅数小时内才允许公鼠交配。 雌鼠交配后，在阴道口形成一个白色的阴道栓，是公鼠的精液、母鼠的阴道分泌物和阴道上皮混合遇空气后变硬的结果，可防止精子倒流，提高受孕率。阴道栓常视为交配成功的标志。阴道栓在交配后12～24小时自动脱落。 雌鼠产后12～24小时可发情，此时交配可造成产后妊娠（边哺乳边怀孕）。有时，由于延迟着床，此妊娠期要比一般妊娠期长，可达31～35天。此外雌鼠与不育雄鼠交配或用机械方法刺激宫颈可产生假性妊娠（pseudopregnancy），一般可维持10～12 天，有时长达3周。 4. 妊娠 妊娠期19～21天，妊娠期的长短与小鼠品系及个体、环境因素、排卵数量、受精卵种植率、胎次等有关。 5. 分娩 小鼠的分娩多在夜间进行。产前不安，不停地整理产窝，约4分钟产仔一只，1分钟后胎盘产出，母鼠将胎盘嚼食。整个过程约经1小时。有时可出现因受精卵种植延迟导致的产后3～5天又产仔的现象。 小鼠每胎产仔6～15只，产仔数取决于品系、胎次、饲养条件、营养条件等。第2～6胎产仔数较多，一般7胎后产仔数逐渐下降。 6. 哺乳 哺乳期18～23天，小鼠带仔数一般为8～10只，因母鼠营养状况、体质状况、 生产能力等因素的不同而变化。母鼠哺乳仔数太多可导致仔鼠发育不均。如带仔数不足时可将其它多余的同龄仔鼠放入寄奶代乳，但放入前应使其感染新窝的气味，以免被代乳母鼠咬死。留种仔鼠可适当延长哺乳期到23天。 7. 繁殖时限 小鼠性活动可维持1年左右，作为种鼠使用时间一般为6～8个月,之后其繁殖能力下降,仔鼠质量越来越差，因此应予淘汰。近交系小鼠一般连续生产5～6胎,即可淘汰。 五、遗传学特性 小鼠共有20对染色体（2n=40），已培育成许多近交系。 小鼠是遗传学研究中最常用的哺乳类实验动物之一，也是目前遗传学背景知识研究得最详尽的动物之一，研究最为充分的是组织相容性复合体，毛色基因等。毛色基因是识别品系的最简易的标志。小鼠毛色由五个主要的基因位点所决定即Aa、Bb、Cc、Dd、Ss。小鼠的组织相容性复合体（H）调控着细胞表面分子的表达,调节主要免疫功能，其中H2位点位于第17条染色体上，是决定异体排斥的位点。它可以作为小鼠遗传检测的指标，也是排斥异体组织抗原的主要成分。 第二节 小鼠的主要用途 小鼠在科学研究中的使用数量是首屈一指的。小鼠在生物学、医学、农业、化工、畜牧兽医等学科的科学研究中都有非常重要的作用。尤其在生命科学研究中其应用范围遍及各个领域如生殖生理、肿瘤、毒理、药理、免疫和微生物的研究工作以及药品、生物制品的制造和检定工作。其主要用途有以下几方面： 一、遗传学和遗传性疾病的研究 由于小鼠生长繁殖周期短，已培育成许多近交系及突变系，对遗传学研究提供了十分方便的条件。 小鼠的毛色基因已研究得比较清楚， 因此毛色常作为小鼠遗传学分析中的遗传标记和品系鉴定的依据之一。具有遗传性疾病的突变系为研究人类遗传性疾病的病因、发病机理和治疗，提供了自然的模型动物。如家族性肥胖、白化病、全身性红斑狼疮、侏儒症等都有相应的突变系小鼠可供研究使用。 转基因小鼠可用于研究基因的功能、表达和调节，探索疾病的分子遗传学基础和基因治疗的可能性和方法。 小鼠品系多，并存在遗传上相关的许多同源近交系，重组近交系等。重组近交系小鼠是将双亲品系的基因自由组合和重组产生一系列的子系，这些子系是小鼠遗传学分析的重要工具，主要用于研究基因定位及其连锁关系。同源近交系小鼠常用来研究多态性基因位点的多效性，基因的效应和功能以及发现新的等位基因。 二、肿瘤学研究 由于小鼠有许多近交系，部分近交系有其特定的自发性肿瘤，可利用其自发肿瘤与人体肿瘤的相似之处做为动物模型进行肿瘤发生、发展和治疗的研究。同时，胸腺严重缺陷的裸小鼠可接受人类各种肿瘤细胞的植入，成为活的癌瘤细胞“试管”，是研究人类肿瘤生长发育、转移和治疗的绝佳动物。目前，小鼠已成为肿瘤研究中的主要动物，用于原病毒基因组学说和癌基因假说的研究。AKR小鼠白血病被证明是遗传因素影响下,有病毒诱发的传染病。 三、传染性疾病的研究 小鼠对多种微生物易感,如沙门氏菌、日本血吸虫病、脊髓灰质炎和钩端螺旋体等,常用小鼠感染诱发出类似于人类的传染性疾病，而制造出相应的动物模型，从而对病原体的致病力，宿主抵抗的机理、病理和治疗进行研究。如，麻风是由麻风杆菌引起的传染病，皮肤、鼻和上呼吸道以及外周神经均有病变，神经受累常可造成手足残废和面部毁形。将麻风杆菌接种于免疫功能低下（去胸腺加全身X 光照射）小鼠的足垫或耳部，可造成此病的动物模型，用以研究麻风杆菌的生物学性状和评价抗麻风药物的药效等。 四、药物研究 小鼠常用于药物安全性评价、治疗效果评价、效价测定及生物制品检定。小鼠特别适合于药物急性毒性实验，测定药物或化学制剂的半数致死量（LD50）和药物致癌性试验。小鼠广泛用于血清、疫苗等生物制品的检定。还可用小鼠热板技术引起的后爪运动或机械压尾评价止痛药。 五、免疫学研究 利用免疫功能缺陷的小鼠进行免疫机制的研究。80年代培育出的Scid小鼠是一种先天性T和B细胞联合免疫缺陷的突变系动物，可用于研究LAK细胞、巨噬细胞等自然防御细胞和免疫辅助细胞的分化和功能。 使用BALB／c、AKR、C57BL等小鼠免疫后的脾细胞与骨髓瘤细胞融合， 进行单克隆抗体的制备和研究。单克隆抗体广泛用于疾病诊断、治疗和分子生物学研究。 六、内分泌疾病的研究 小鼠自发或诱发的内分泌腺结构的缺陷常引起类似人类的内分泌疾病，是内分泌研究领域的很好的动物模型。如胰岛发育不全造成的肥胖症；垂体性侏儒症以及生长激素缺乏造成的侏儒症。 七、老年学研究 由于小鼠寿命短，常用于研究衰老的起因和机理。如，用老年C57BL／6J 雄性小鼠研究表明，鼠脑纹状体多巴胺含量降低，酪氨酸转化率下降，一些物质在下丘脑和纹状体中分解代谢减慢等。垂体功能低下，生长激素缺乏的侏儒小鼠，其寿命只有4.5个月,且表现为灰发，皮肤萎缩，双眼白内障，H3～胸腺嘧啶吸收率低，说明生长激素与老化有关。 八、其它 小鼠还用于其它许多方面的研究，如计划生育、物理损伤性疾病、营养学、悉生学等。 另外，烧伤、冻伤、放射病、肝硬化、胰腺炎等疾病均可用小鼠复制。 |
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第五节 繁殖生产 不同品系、不同种群有不同的繁殖方法，适宜的繁殖方法是保证小鼠质量的前提。 一、种鼠 种鼠可由外单位引入，也可由本单位自己保种。引种小鼠必须遗传背景明确，来源清楚，有完整的资料，包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要生物学特性等。 进入生产的种鼠要经过挑选，即选种。选种在小鼠离乳时进行初选，种鼠应符合该品系的遗传学特征，无变异。双亲体质健康无疾病，活力强。初选时按健康标准一般选留2～5胎的仔鼠，适当延长哺乳期到23天，然后雌雄分开。同时做好记录。在育成期中出现异常者应立即淘汰，同时应适当控制营养，以防种鼠过度肥胖，影响配种。配种前按健康标准和生殖器情况进行定选。小鼠初配的适龄期为60～90天。应选择体质强壮、活泼、被毛紧披而有光泽、尾肥嫩粉红血管明显、眼鼻无异物、无外伤肿胀溃烂、外生殖器发育良好、生长发育正常的小鼠作为种鼠。 二、繁殖方法 将种鼠按事先定的配种方案置于繁殖盒中，建立繁殖卡。配种方案因小鼠的种类品系不同而不同。 广义的繁殖如大群生产，有两种方法： 1. 长期同居法：又称频密繁殖法，此法在管理上较简单， 可减少疾病传染机会。采用将1只雄鼠与1只雌鼠同居。在雌鼠分娩后几小时内可再行交配受孕。一般情况下每只雌鼠每月可产1胎。这样可充分利用小鼠的繁殖能力（特别是利用雌鼠产后发情）。由于雌鼠边怀孕边哺乳负担过重，应注意加强营养。 2. 定期同居法：又称非频密繁殖法。将1只雄鼠与6只雌鼠编为一繁殖单元。 每周向雄鼠笼放入1只雌鼠，即依周次使雄鼠与1只雌鼠同居，同时将受孕雌鼠提出，置单笼分娩、哺乳、离乳，以此类推。每只雌鼠生产周期为42天，比长期同居法要长。但便于有计划供应和生产，而哺乳仔鼠又得到充分的营养，仔鼠发育好，离乳时平均体重较前法重1～2g。这时，要经常检查种鼠的生殖能力，及时淘汰受孕能力低的种鼠并增补新种。 三、不同类型鼠群的繁殖 1. 近交系的维持和生产 繁殖用原种小鼠必须遗传背景明确,来源清楚、有完整的谱系资料,包括品系名称、近交代数、遗传基因特点及主要生物学特征等。引种小鼠应来自近交系的基础群， 以2～5对同窝个体为宜。 小鼠近交系一旦育成，应按保种的有关规定，维持其特定的生物学特征的稳定，保持其基因性同一和基因纯合性。近交系小鼠的维持和生产包括4个群。生产过程一般是从基础群移出种子，经扩大群扩增后，建立生产群，由生产群繁殖仔鼠进入供应群（见图1）。 （1）基础群：严格采用全同胞兄妹交配，用基础平行线系统保持品系的种源，为扩大群提供种鼠。在繁殖过程中一般保持2～4个平行谱系分支,在4～7代时进行一次修饰。每个谱系分支上，保留7～12个繁殖对，留种的同胞兄妹保持相应的数量及与原品系相同的特性。应保证小鼠不超过5～7代能追溯到一对共同祖先。 （2）血缘扩大群：种鼠来源于基础群，采用全同胞兄妹交配繁殖。用来扩大群体个体数量，为生产群提供种鼠。血缘扩大群应设个体繁殖记录卡，本群小鼠不应超过5～7代而能追溯到其在基础群的一对共同祖先。 （3）生产群：随机交配，用于生产供实验用的小鼠，经4 个世代繁殖后即可淘汰。生产群种小鼠来自基础群或血缘扩大群。为了便于控制随机交配不超过4个世代,可采用挂指示牌的方法：从扩大群来的种鼠F0代挂白牌，F1代挂蓝牌，F2代挂黄牌，F3代挂红牌。红牌表示已繁殖到第三世代，需更换种鼠，从扩大群取来种鼠，继续生产。 （4）供应群：来源于上述生产群中每个世代繁殖的仔鼠，育成后供实验用。 为保证上述4个种群连续性，应做好配种计划。 注意在生产中从基础群到生产群必须控制在15代以内，即生产群的小鼠上溯15代可在基础群找到共同祖先。各群之间不能有小鼠逆向流动。当小鼠出现断代时，可从血缘扩大群中选谱系记录清楚的小鼠重新建立基础群。 同时应注意某一品系小鼠混入其它小鼠时应立即淘汰,逃出鼠盒的小鼠应立即淘汰。经过某些技术处理如人工代乳、卵巢移植等的小鼠可能形成亚系或亚群，而不应与原种群混杂。 2. 封闭群小鼠的维持和生产 （1）维持 根据封闭群遗传学要求，封闭群中不应产生小群体，也不应改变封闭群特有的杂合性，应保持其遗传基因的稳定及其异质性和多态性，小鼠保种时应尽可能多的保留繁殖个体。因此其维持和生产可采用以下几种避免近交的交配制度进行，以使近交系数的上升率不超过1％。 纯系维持 种鼠增埴 大群供应生产（四代繁殖法） │ └──────┐ │ 兄妹交配 │ ├────→ │ ↓ ↓ 兄妹交配♀♀ ♂♂ │ 任意交配 └────→ ─┐ │ 兄妹交配 │ 供应 ├────→ │ ↓ │ 兄妹交配♀♀ ♂♂ │ 任意交配 │ └────→ ─┼─→ │ 兄妹交配 │ ├────→ │ ↓ │ 兄妹交配♀♀ ♂♂ │ 任意交配 │ └────→ ─┘ 图1 纯系小鼠大群供养生产的组织形式 ①随机配对交配：配种前将雌雄个体或组分别编号，同一父母的留种鼠或同一生产单元的留种鼠编为同一号，随机与不同号的留种鼠配对。此法适用于中等或大群体维持生产。 ②分组交叉交配：将同一批种鼠，雌雄分别分组编号，配种时按组别交叉配种，可避免同窝雌雄近亲交配。如按饲养室或笼架，可将生产群分为1到n的n个组，每组留种鼠按组别编为相应的号，配种时用1号雄鼠配2号雌鼠，2号雄鼠配1号雌鼠，依此类推。此法用于大群体生产。 ③循环交配：将留种同窝雌雄个体分别编号，如雌雄鼠都编为1号， 在配种时雄性编号不变，与相邻编号的雌鼠如2号交配，2号雄鼠与3号雌鼠交配，依此类推，n号雄鼠与1号雌鼠交配，如此形成一个环状循环。此法用于小群体生产。 （2）生产： 常用的方法有一雄多雌同居交配法和雌雄1：1同居交配法。前法优点是孕鼠另居分娩，泌乳好，仔鼠健康。缺点是生产周期长，也可因打架而咬伤。后法优点是繁殖周期短，每月一胎。缺点是母鼠体质消耗很大，如营养跟不上，会影响动物质量。 在封闭群小鼠的生产中，不应与外来个体交配繁殖，而导致遗传污染。也不应使群体内的小鼠长期与大群隔离，而出现遗传分化。应尽力避免有意识地留种或选择小鼠进行繁殖包括对小鼠繁殖能力的选择，否则可导致小鼠固有遗传特征的改变。 四、不同鼠群的管理 1. 生产鼠群的管理 繁殖种鼠负担重消耗大，要保证充足的营养，应提高饲料中蛋白质含量，在饲料中加入鸡蛋或奶粉，定时补充葵花籽。 要及时进行怀孕检查，通过观察阴道栓可知其准确怀孕日期。同时小鼠怀孕10天左右时，腹部隆起。当倒提小鼠时这种隆起可非常容易的观察到。 对于封闭群小鼠，种鼠置同一笼中配种后20天或仔鼠离乳后20天仍未受孕，可调换公鼠，20天后仍未受孕可将其淘汰。 及时淘汰体质差，与原品系特征不同的种鼠，繁殖种鼠月龄超过9～11 月也要及时淘汰。 雌鼠分娩时其周围环境尽量不要变动，否则可使雌鼠受惊，导致食仔。 2. 核心种群的管理 核心种群是为生产鼠群提供种鼠的种群，对于近交系则核心鼠群就是基础鼠群，其饲养管理比生产鼠群更细致。要根据育种计划进行配种留种，选2～5胎的仔鼠留种，新生仔鼠按1：1的比例选留，哺乳期可延长至23天。 3. 育种鼠群的管理 核心种群来的育种幼鼠要雌雄分开饲养，同窝雄鼠可置于同一笼中，注意不同窝离乳的雄鼠不应同笼饲养,否则可引起打斗而致伤。注意营养适中防止过肥,而影响配种。其它饲养管理同生产种鼠一样，要保证充足的饲料饮水，及时更换垫料。如有可疑病鼠立即全盒小鼠淘汰。 对于生长发育异常,仔鼠有卷尾、脑水肿、眼睛异常、腹泻、发育不良、鼻端脱毛、被毛脱落、断尾、被毛变质、咬伤和其它不正常的小鼠应及时淘汰。 4. 待发鼠群的管理 繁殖鼠润群中离乳的幼鼠可转入待发鼠群饲养，雌雄严格分开，放入群养盒，并根据小鼠的体重及时将过分拥挤的小鼠再次分开。此时不同鼠笼的待发鼠不可混养，以防咬伤。及时做好转入、供应记录，使帐目相符。其它方面的管理与生产种鼠相同。 五、计划生产和记录 1. 计划生产 （1）计划配种日期＝使用日期－需要天数 （2）需要天数＝性周期＋妊娠期＋达到要求体重所需日龄 如：某实验人员需于八月一日使用体重18～20g的昆明小鼠，则 需要天数＝5＋21＋28＝64天 其中28天是小鼠从出生到生长至体重为19g 左右所需时间（查昆明小鼠日龄与体重的相关关系表）。 计划配种日龄＝五月二十九日 2. 记录 科学管理必须有各种完好的记录。小鼠生产繁殖中的记录工作非常重要，应随时记录生产情况，并及时总结，以发现和解决生产中出现的任何问题。 工作记录包括： （1）种群记录和生产记录：包括谱系记录、品系记录、个体记录、繁殖记录和工作记录。 对于近交系小鼠应包括：①繁殖盒上的繁殖卡，包括品系名称、近交世代数、双亲号码、个体编号、出生日期、断奶日期、兄妹分窝日期、配种日期、产仔数、仔鼠雌雄数、体重、淘汰日期等。繁殖卡应永久性保存。②谱系记录本，主要用于小鼠个体的编号，可依出生日期顺序填写，包括鼠号、代数、胎次、父号、母号、生日、交配繁殖号等。谱系记录本应与繁殖卡相对应，并永久保存。③谱系图。根据繁殖卡和谱系记录本可画出小鼠繁殖的直观的亲缘关系图，便于生产的总体安排。④生产记录，用于汇总某饲养区的生产情况，记录小鼠的离乳、淘汰、留种、意外死亡、供应等情况。⑤工作日志，记录工作人员的每日操作情况。⑥供应记录，用于记录小鼠的日龄、品系、体重等情况，以便迅速及时地供给实验者。 对于封闭群小鼠应包括：①繁殖卡，包括品种、编号、父母鼠号、出生日期、同窝个数，配种比例及繁殖情况等。繁殖卡应永久保存。②留种卡，包括品种、编号、父母鼠号、出生日期、同窝个数等。③生产记录和工作日志同近交系小鼠。 （2）环境记录：温湿度记录、天气情况记录、消毒灭菌记录。 （3）动物健康记录。 （4）实验处理及观察记录。 [ Last edited by xcw1215 on 2006-2-25 at 11:21 ] |
3楼2006-02-25 11:19:14
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第三节 常用品种及品系 一、远交群 1. 昆明小鼠（KM） 白色。1926年美国Rockfeller 研究所从瑞士引入白化小鼠培育成瑞士种小鼠（Swiss）。1946年我国从印度Haffkine 研究所将瑞士种小鼠引入云南昆明,1952年由昆明引入北京生物制品所，1954年推广到全国各地。该小鼠特点是高产,抗病力强，适应性强，常见的自发肿瘤为乳腺癌，发病率约25％。国内各地昆明小鼠遗传背景不很一致。目前由KM小鼠已培育成C～1（中国1号）、615、TA2、AMMS／1等近交系。KM小鼠广泛应用于教学，生殖生理、肿瘤、毒理、药理、免疫和微生物的科研工作以及药品、生物制品的制造和鉴定工作。 2. NIH 白色。由美国国立卫生研究院培育而成，曾有一段时间的近交历史。繁殖力强，产仔成活率高，雄性好斗致伤。广泛用于药品的药理和毒理研究，以及生物制品检定。 3. LACA 白色。1935年英国Carworth公司由美国Rockfeller研究所引进，经20 代近交培育后，采用随机交配繁殖，命名为CFW。后又引入英国实验动物中心（LAC），改名为LACA。我国1973年由英国实验动物中心引进。 二、近交系： 1. A 白化，毛色基因为abcD。特性：乳腺癌发病中等，老年动物有肾病，可的松诱发先天性腭裂的发病率高，自发性肺肿瘤发病率高，对X-射线非常敏感。 2. AKR 白化，毛色基因为aBcD。特性：淋巴细胞性白血病发病率为68～ 91 ％。AKR／J和AKR／Cum对对方的自发性淋巴瘤排斥。血液内过氧化氢酶活性高，肾上腺脂类浓度低，补体5缺损，干扰素产量高。 3. BALB／c 白化，毛色基因为AbcD。特性：乳腺癌发病率低，与其它品系相比血压较高，对慢性肺炎敏感，对放射线特别敏感，繁殖期长。 4. C3H 野生色、赤褐色，毛色基因为ABCD。特性：繁殖小鼠和幼年小鼠乳腺癌发病率高。对肝致癌物质感受性强，对炭疽杆菌有抵抗力。母性不强，繁殖困难。 5. C57BL 黑色,毛色基因为aBCD。特性：乳腺瘤发病率低,对化学致癌剂不敏感。全身照射后淋巴瘤发病率90～100％。干扰素产量高。常被认作“标准”的近交系，为许多突变基因提供遗传背景。 6. DBA 灰色，毛色基因为abCd。DBA／1特性：对许多DBA／2的肿瘤有抗性，75％一年以上的繁殖母鼠或有些18月龄以上的处女鼠产生乳腺瘤；红细胞压积高；对结核杆菌敏感，全部老雌鼠都有钙质沉着，对鼠伤寒C5敏感。DBA／2特性：肿瘤发病率在不同鼠群有差异。血压相对低。听源性癫痫发病率为35日龄100％，55日龄为5％。大约一半动物产生肝颗粒细胞瘤；红细胞压积高。对鼠伤寒C5有抵抗力，乳腺癌发病率繁殖雌鼠为66％，育成雌鼠为30％；白血病发病率雌鼠为6％，雄鼠为8％。 7. TA1 白化，毛色基因为abc。1955 年天津医学院由市售杂种白化小鼠和昆明小鼠近交培育而成。 特性：繁殖母鼠乳腺癌发病率为1％，处女鼠和公鼠为0。 卵巢癌发病率为9.5％；肺癌发病率为2.4％；淋巴性白血病发病率为1％。对慢性肺炎敏感。平均寿命：雄性555天，雌性673天。平均体重（43天）：雄性21克，雌性20克。 8. TA2 白化，毛色基因为aBcd。1963年由天津医学院将市售杂种白化小鼠和昆明小鼠近交培育而成。 特性： 乳腺癌发病率在繁殖鼠为81.4％，在处女鼠为41.4％，雄性鼠为3.2％。肺癌发病率为2.7％；卵巢癌发病率为4.4％；淋巴性白血病为1.3％。寿命：雌性416天，雄性479天。平均体重：雄性22克，雌性21克（56天）。 9. 615 灰色，毛色基因为abC。1961 年中国医学科学院输血及血液病学研究所将普通白化小鼠与C57BL／血研小鼠杂交，而后采用近亲交配繁育而成。 特性：平均产仔数6～7只，平均断奶数6.3只。繁殖鼠乳腺瘤发病率为14.3％，18 月龄肺腺瘤和白血病发病率分别是36.7％和5.8％。 三、突变系 小鼠的几种常见的突变基因如下： 1. nu nude（裸体）。六十年代后期发现,是八号染色体上的隐性基因突变所致。 当nu基因纯合时，小鼠表皮无毛，胸腺先天性缺陷，发育不全，T 淋巴细胞缺损，缺乏免疫应答性，致使免疫机能低下，易受外界细菌和病毒的侵染而发生疾病，因此需在无菌或无特定病原体的条件下饲养。纯合的新生仔鼠无鼻毛或有少量卷曲鼻毛，其寿命与环境控制密切相关，普通环境下存活14～30天，SPF及无菌条件下寿命达1年以上，最长2年。 许多不同类型的组织可在裸鼠身上移植成功，而不发生免疫排斥反应，适于免疫生物学、免疫病理学、移植免疫、肿瘤免疫、病毒和细菌免疫学、胸腺功能研究，为实验免疫学和实验肿瘤学提供了新的有效工具，可用于建立人癌移植瘤模型，进行抗肿瘤药物的化学治疗研究。同时裸鼠也是寄生虫感染机制研究、疫苗、菌苗安全性和免疫源性生物制品检定的最好实验材料和动物模型。裸鼠还能感染麻风杆菌并在体内繁殖，这对研究麻风的发病机理和制造麻风疫苗提供了原料。 2. dw 是侏儒（dwarf）的缩写。这种小鼠由于缺乏脑下垂体前叶的生长素和促甲状腺激素，生长发生障碍，小鼠出生7天后，可看到小鼠体形相对小。两性均不育。这种动物可以作为研究内分泌的动物模型。 3. hr hairless（无毛）。出生后14天左右上眼睑、下腭部、 四脚趾背部开始脱毛，随后是尾背部及全身，只留下一些散在的毛，但触须还保留，几乎成裸体，雌性母性差或不育。 4. ob obese（肥胖症）。是六号染色体上的隐性基因纯合所致。obob小鼠出生后4～6周即显示肥胖症，9～10周出现高血糖， 不育， 可作为人类肥胖症（ obesity 或diabetes）的疾病模型。 第四节 饲养管理 来源清楚的种子动物、良好的环境控制、标准化的饲料和科学化的管理是培育生产出高品质、标准化实验小鼠以及获得准确实验研究结果的重要条件，因此必须进行严格的科学化管理。 一、饲养环境 小鼠对环境的适应性的自体调节能力和疾病抗御能力较其他实验动物差，而小鼠的品种和品系繁多，各个品种和品系都有自己的特殊要求，因此必须根据实际情况给予一个清洁舒适的生活环境。不同等级的小鼠应生活在相应的设施中。 小鼠临界温度为低温10℃，高温37℃，温度中性范围30～33℃。饲养环境控制应达到如下要求：温度18～29℃；相对湿度40～70％；最好控制在18～22℃,湿度50～60％。一般小鼠饲养盒内温度比环境高1～2℃，湿度高5～10％。 要保持温度、湿度相对稳定，日温差不超过3℃,否则会直接影响小鼠的生长发育、生产繁殖、甚至导致小鼠发生疾病，从而影响实验结果。温湿度的相对稳定对于建筑条件较差的地方可用空气调节器、加湿器、在北方用暖气进行调节。为了保持室内空气新鲜，氨浓度不超过20ppm，换气次数应达到10～20次／小时。 现在我国普遍采用无毒塑料鼠盒，不锈钢丝笼盖，金属笼架。笼架一般可移动，并可经受多种方法消毒灭菌。用清洁层流架小环境控制饲养二、三级小鼠不失为一种较好的方法。笼盒既要保证小鼠有活动的空间，又要阻止其啃咬磨牙咬破鼠盒逃逸，便于清洗消毒。带滤帽的笼具可减少微生物生物污染，但笼内氨气和其它有害气体浓度较高，有时影响实验结果的准确性。饮水器可使用玻璃瓶、塑料瓶，瓶塞上装有金属或玻璃饮水管，容量一般为250ml或500ml。 垫料是小鼠生活环境中直接接触的铺垫物，起吸湿（尿）、保暖、做窝的作用。因此垫料应有强吸湿性、无毒、无刺激气味、无粉尘、不可食，并使动物感到舒适。垫料必需经消毒灭菌处理，除去潜在的病原体和有害物质。一般垫料以阔叶林木的刨花或锯末为宜，也可用玉米芯加工粉碎除尘后使用。 在实验中切忌用针叶木（松、桧、杉）刨花做垫料，这类刨花发出具有芳香味的挥发性物质，可对肝细胞产生损害，使药理和毒理方面的实验受到极大干扰。 国外有专门的垫料生产企业，进行垫料的生产，而我国的垫料产业尚需开发。目前我国实验动物部门大部分采用木材加工副产品如锯末、刨花等，其来源、树木种类很难控制，给实验动物质量控制带来很多不利影响。 二、饲料和饮水 1. 饲料（feed） 小鼠应饲喂全价营养颗粒饲料，饲料中应含一定比例的粗纤维，使成型饲料具一定的硬度，以便小鼠磨牙。同时应维持营养成分相对稳定，任何饲料配方或剂型的改变都要作为重大问题记入档案。 不同种类的小鼠有不同的营养标准，如纯系小鼠和种鼠的饲料所含蛋白质成分高于一般小鼠，DBA小鼠需要高蛋白质低脂肪的饲料。 2. 饮水（drinking water） 小鼠的水代谢相当快，应保证足够的饮水。一级动物饮水标准应不低于城市生活饮水的卫生标准。二级动物的饮水须经灭菌处理。也可用盐酸将水酸化（PH2.5～3.0），使小鼠饮用酸化水，酸化水在一定程度上可抑制细菌的生长并杀死它们，其灭菌效果可达到要求。三、四级动物饮水用高压高温方法灭菌。 三、一般饲养管理 小鼠的饲养管理非常繁琐，要求饲养人员具有高度的责任心，随时检查小鼠状况，出现问题立即加以纠正。为了使饲养工作有条不紊，必须将各项操作统筹安排，建立固定的操作程序，使饲养人员不会遗漏某项操作，同时也便于管理人员随时检查。 1. 饲喂 小鼠胃容量小，随时采食，是多餐习性的动物。成年鼠采食量一般为3～7克／天，幼鼠一般为1～3克／天。应每周添料3～4次，在鼠笼的料斗内应经常有足够量的新鲜干燥饲料，在小鼠大群饲养中，每周应固定两天添加饲料，其它时间可根据情况随时注意添加。 根据小鼠不同阶段的生长发育特点，应有不同的给饲标准。由于种鼠群和生产鼠群交配繁殖频繁，尤其生产种母鼠的负担重，能量消耗大，因此除供给足够的块料外，还要定时饲喂少量葵花籽、麦芽和拌有鸡蛋的软料。葵花籽供应量为0.5～1克／天／只成年鼠。而麦牙和软料由于微生物条件较难控制，目前趋于淘汰不用，而致力于颗粒料的全价营养，即用维生素合剂代替。 2. 给水 用饮水瓶给水，每周换水2～3次，成年鼠饮水量一般为4～7ml／天，要保证饮水的连续不断，应常检查瓶塞，防止瓶塞漏水造成动物溺死或饮水管堵塞使小鼠脱水死亡。小鼠在吸水过程中，口内食物颗粒和唾液可倒流入水瓶。为避免微生物污染水瓶，换水时应清洗水瓶和吸水管。严禁未经消毒的水瓶继续使用。 3. 清洁卫生和消毒 每周应至少更换两次垫料。换垫料时将饲养盒一起移去，在专门的房间倒垫料，可以防止室内的灰尘和污染。一级以上动物的垫料在使用前应经高压消毒灭菌。 要保持饲养室内外整洁，门窗、墙壁、地面等无尘土。 坚持每月小消毒和每季度大消毒一次的制度。即每月用0.1 ％新洁尔灭喷雾空气消毒一次,室外用3％来苏尔消毒,每季度用过氧乙酸（0.2％）喷雾消毒鼠舍一次。笼具、食具至少每月彻底消毒一次，鼠舍内其它用具也应随用随消毒。可高压消毒或用0.2 ％过氧乙酸浸泡。 应有周转用房，在饲养室使用一年时，将小鼠全部移入，原饲养室彻底整修消毒。 4. 动物健康的外观检查 这是检查动物健康状况的一项常规工作。外观判断小鼠健康的标准是：①食欲旺盛；②眼睛有神，反应敏捷；③体毛光滑，肌肉丰满，活动有力；④身无伤痕，尾不弯曲，天然孔腔无分泌物，无畸形；⑤粪便黑色呈麦粒状。 5. 性别鉴别 成年鼠性别很易区分，雄鼠的阴囊明显；雌鼠可见阴道开口和五对乳头。 幼鼠或仔鼠则主要从外生殖器与肛门的距离判定，近者为雌，远者为雄。另外，雌鼠肛门和生殖器之间有一无毛小沟，而雄鼠则在肛门和生殖器之间长毛。再者，雌鼠有比雄鼠明显很多的乳头。 6. 疾病预防 作为实验动物，实验前应健康无病，所以应积极进行疾病预防工作，而一旦发病则失去了作为实验动物的意义。饲养繁殖过程中应注意以下几点： （1）有疑似传染病的小鼠应将整盒全部淘汰,然后检测是否确有疾病，再采取相应措施。 （2）为了保持动物的健康，必须建立封闭防疫制度以减少鼠群被感染的机会。 即应注意以下几点： ①新引进的动物必须在隔离室进行检疫，观察无病时才能与原鼠群一起饲养。 ②饲养人员出入饲养区必须遵守饲养管理守则，按不同的饲养区要求进行淋浴、更衣、洗手以及必要的局部消毒。 ③严禁非饲养人员进入饲养区。 ④严防野生动物（野鼠、蟑螂）进入饲养区。 |
2楼2006-02-25 11:17:33
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第六节 常见疾病 小鼠的一些常见疾病可引起小鼠发病甚至死亡，使实验中断，造成人力、物力和时间的极大浪费。有些病源呈隐性感染，可使实验结果受到极大干扰，以致导致错误的结论。有些疾病为人畜共患病，则更加具有危险性。小鼠的一些常见疾病有以下几种。 一、鼠痘（Mouse Pox） 由鼠痘病毒（poxvirus of mice,MPV）引起，多呈爆发性流行，致死率较高，常造成小鼠全群淘汰，危害极大。临床表现以四肢、尾和头部肿胀、溃烂、坏死甚至脚趾脱落为特征，故又称脱脚病病毒(ectromelis virus)。 1. 分布及病原 鼠痘在我国鼠群中呈散发性流行。 MPV属痘病毒科脊索动物痘病毒亚科正痘病毒属，本病的自然宿主为小鼠,不同品系小鼠的易感性差异很大,A、DBA、C3H等品系易感,C57BL对MPV的抵抗力强，呈隐性感染,因而成为主要的潜在疫源。本病常常感染野生小鼠，使野生小鼠成为另一种危险的传染源。 2. 流行病学 MPV病毒经皮肤伤口、消化道、呼吸道感染。 妊娠母鼠可将病毒垂直感染给胎儿。另外在动物实验中如病毒传代、肿瘤移植,可将病毒直接接种给小鼠,而导致小鼠感染。 3. 临床症状 首次感染的小鼠多呈急性型发病，病鼠被毛粗乱，食欲减退，于4～12小时内死亡。亚急性型（皮肤型）病鼠口、脸、鼻、眼睑肿胀甚至破溃，四肢及尾部肿胀破溃有浆液性分泌物，随后结痂进而血液供应中断而发生坏疽，1～2天坏疽部位脱落。还可引起孕鼠流产。慢性型病鼠由上两种病型鼠迁延转化而来,见于本病流行后期,生长发育缓慢，产仔数明显减少。 4. 病理 病理解剖可见全身脏器几乎均被累及，其中以脾、肝、淋巴结与皮肤的病变最重。脾肝表面可见淡黄或白色坏死灶，严重者可全部坏死。 5. 诊断 本病的诊断可根据鼠痘的典型特征如头部，眼睑，四肢及尾肿胀溃烂或脱落作出初步诊断，然后分离病毒或利用ELISA诊断试剂盒检测抗体而确诊。 6. 预防 为了预防本病，应严格管理,禁止非工作人员出入饲养区,防止野生动物接触小鼠。从外单位引种时必须确保无本病，方可混群。 发病动物立即全群淘汰处死，尸体焚烧，饲养室薰蒸消毒，封闭三个月。 二、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎（Lymphocytic Choriomeningitis，LCM） LCM是由淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（Lymphocytic Choriomeningitis Virus ，LCMV）引起的人和许多种动物的人畜共患病。小鼠感染后呈三种病型即内脏型、大脑型和迟发型；人类感染后主要表现为流感样症状和脑膜炎。 1. 分布 啮齿类鼠科和仓鼠科动物是LCMV的自然宿主。目前我国鼠群中仍有LCM散发性流行。人类感染LCMV也非常广泛，我国及世界各地有关报道很多。因此，应致力于建立无LCMV的鼠群。 2. 病原 LCMV属砂粒病毒科砂粒病毒属，为单股RNA病毒，只有一个血清型。LCMV 耐酸碱能力极差，极不耐热，偏酸或偏碱、紫外线、加热均可将其灭活。对化学消毒剂敏感，乙醚、0、1％甲醛、去污剂都能杀死LCMV，但石炭酸对其影响较小。 3. 流行病学 LCM为人畜共患病,小鼠、豚鼠、仓鼠、犬、猴、鸡、兔和棉鼠均易感，有实验证明金黄地鼠对LCMV易感，而大鼠则不易感。 只有持续感染的小鼠和急性感染的仓鼠能传播病毒。病鼠通过唾液、尿和鼻分泌物排出病毒。健康鼠可通过呼吸道感染，乳鼠通过乳或子宫垂直感染，许多鼠成为不发病的隐性带毒者。 LCMV病毒是非溶细胞性病毒，在动物体内增殖并不对机体产生损害，而是动物本身对病毒的免疫反应，导致对机体的损害而表现出临床症状。急性感染的小鼠由于不同的组织和病毒数量而产生不同程度的免疫反应，反应强烈的引起动物死亡，反应不强烈的小鼠则转成持续或慢性感染。子宫内感染至出生1～2天时感染的小鼠视病毒为“自身”物质，不发生免疫反应，也不出现病变，而成为终身带毒排毒者。LCM病毒在T细胞内增殖导致其功能的丧失，从而影响宿主的细胞免疫功能。所有以上几点，都利于引起LCMV的持续感染。 4. 临床症状 LCMV感染后的临床症状可表现为三种类型：内脏型、大脑型和迟发型。内脏型 LCM小鼠表现被毛粗乱、结膜炎，有时出现腹水。大脑型LCM由脑内及神经途径感染而产生,病鼠表现为脑内接种后5～6天，有的小鼠突然死亡，其它小鼠表现被毛粗乱、懒动、嗜睡、消瘦，常见结膜炎和面部水肿。倒提时小鼠头部震颤,肢体痉挛,后肢强直性伸展。小鼠于出现上述症状后1～3天死亡。迟发型LCM常发生于子宫内感染和出生后1～2 天感染的小鼠,病毒在体内增殖，但无症状，直到九个月后,可见病鼠体重减轻、被毛粗乱、蛋白尿、腹水、弓背等症状。 人类感染LCM后，表现为流感样疾病，患者感染后1～2周，出现恶心、厌食、发烧等症状，在恢复期10％患者可出现腮腺炎和睾丸炎。还可引起无菌性脑膜炎、脑膜脑脊髓炎，表现为双侧乳头水肿、精神错乱、四肢麻痹、颈部强直、厌食、头痛等症状。 5. 病理 小鼠感染LCMV后，大脑型LCM在胸腔、腹腔内可见浆液性渗出物， 软脑膜和脉络丛有单核细胞浸润，于6～9天达到高峰，并密集于珠网膜池和各脑室的脉络丛中。电镜下可见特征性的脉络丛上皮细胞胞浆内包涵体。内脏型LCM在感染后6天肝脏内可见小叶性肝炎，散见嗜酸性细胞坏死区。迟发性LCM可见淋巴细胞、单核细胞、浆细胞浸润肾脏的肾小球和脑脉络丛等组织。 6. 诊断 LCM的诊断可通过病毒的分离与鉴定及血清学试验来进行。 取病鼠病理组织制成冰冻切片，采用免疫荧光试验确定细胞浆内特异性的病毒抗原包涵体的存在。还可采用酶联免疫吸附试验检测LCMV抗体。 7. 预防 由于野鼠常常携带LCMV，因此饲养区必须防止野鼠进入。饲料应妥善保存，防止野鼠污染。饲养室应降低饲养密度，加强管理。 一旦鼠群感染LCMV，应将整群全部淘汰，尸体焚烧。 以血清学方法检测小鼠，取无LCMV血症和抗体的小鼠为母鼠，进行剖腹产手术，人工代乳仔鼠，饲养繁殖，可以建立无LCMV的鼠群。 三、仙台病毒感染（Sendai Virus infections） 小鼠仙台病毒很难控制，常呈隐性感染，急性型多见于20日龄左右乳鼠，表现呼吸道症状。仙台病毒感染可对实验研究产生严重干扰,如改变体液和细胞介导的免疫应答,可改变被感染的肿瘤细胞的表面抗原及其致癌性。 1. 分布和病原 小鼠仙台病毒的自然宿主是啮齿类动物。开放环境下饲养的实验小鼠仙台病毒感染非常普遍，曾是世界范围内的传染病控制的难题。 仙台病毒属副粘病毒科副粘病毒属。核酸型为单股负链RNA，只有1个血清型，在世界范围内分离到许多不同的毒株。仙台病毒对热及乙醚敏感，酸性条件下极易灭活。仙台病毒可凝聚和溶解多种动物的红细胞，如小鼠、豚鼠、人、鸡、大鼠、绵羊、兔的红细胞。仙台病毒可特异性地在气管上皮细胞中复制，并于第三天从上皮细胞出芽释放。 2. 流行病学 本病以冬春季多发，在未感染过病毒的易感鼠群中，新生鼠和幼鼠最易感，常发生严重的肺炎，于3～5天死亡。NIH、C3H、DBA／2等品系对本病毒敏感，而C57BL／6 、BALB／c等品系对其抵抗力较强。本病毒主要通过直接接触和空气传播。鼠群中35～ 49日龄的小鼠,主动免疫力尚不成熟，接触本病毒后,易于感染，并成为鼠群中的传染源。 3. 临床症状 小鼠感染本病后可有两种表现型。慢性型多见于幼鼠至42日龄的小鼠，呈亚临床感染，病毒在鼠群中长期存在，并呈地方性流行。急性型病鼠常表现临床症状，即被毛粗乱、呼吸困难、消瘦等。孕鼠死胎率提高，新生乳鼠死亡率上升。 4. 病理 病理解剖可见病鼠肺呈杨梅色，内有血性泡沫样液体，胸腔和心包腔有积液，胸膜粘连。 5. 诊断 本病可依靠小鼠特异的发病日龄作出初步诊断。然后可进行病毒分离和血清学检查。将病鼠的鼻咽冲洗液或肺浸液进行细胞传代，进而依靠血凝试验、补体结合试验或免疫荧光试验检查病毒或抗体，即可确诊。在血清学方法中应用比较好的是酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA）。 6. 预防 本病防治的关键是建立无病毒感染的鼠群，严格控制新动物的引进，及时而定期进行检疫，发现病鼠立即淘汰整个鼠群，用剖腹产技术建立新的种群。或仅保留鼠群中的成年鼠，停止繁殖40天以上，然后恢复再繁殖。 四、小鼠病毒性传染性肝炎（Mouse Hepatitis Virus Infections） 小鼠肝炎病毒MHV（Mouse Hepatitis Viruc）可引起小鼠发生肝炎、脑炎和肠炎，一般呈亚临床感染或慢性感染，而机体抵抗力低时可引起急性发病死亡，导致实验失败。MHV可改变各种免疫应答参数，影响酶的活性，从而对实验产生严重的干扰。 1. 分布和病原 MHV感染在世界范围内累见报道,在我国据报道普通鼠群的感染率可达五分之一多。 MHV属冠状病毒科冠状病毒属，为单股RNA病毒。它有多个毒株，可分为两类，即常在呼吸道增殖的毒株和主要在肠道增殖的毒株，前一类有MHV-1、MHV-2 等， 后一类有MHV-Y等。MHV对乙醚、氯仿敏感，不同毒株对热的抵抗力不同 。MHV可在多种细胞培养物上生长，并形成巨大的融合细胞或蚀斑。 2. 流行病学 MHV经空气和直接接触传播，自然状态下只感染小鼠。 健康鼠通过接触病鼠排泄物和其污染的物品而感染。MHV也可垂直传播。 3. 临床症状 小鼠感染MHV后，急性发病时，病鼠被毛粗乱、消瘦、精神萎靡，有时有腹水,幼鼠可见后肢麻痹。乳鼠可发生腹泻，生长迟缓，进而死亡。小鼠感染低毒力的MHV 时常常呈隐性感染，成为鼠群中的严重传染源。 4. 病理 解剖可见病鼠肝脏表面有出血点和坏死灶。镜下可见肝脏血管周围有淋巴细胞浸润,血管内皮细胞和枯否氏细胞发生坏死，肝细胞呈固缩状态。脾脏发生灶性坏死。MHV 经脑感染时引起脱髓鞘性脑脊髓炎。 5. 诊断 取病鼠肝脑组织制成组织悬液，接种DBT细胞， 观察特征性的巨大融合细胞或蚀斑可对MHV感染作出初步诊断。也可用ABC染色法染色病鼠肝脾组织，观察其细胞浆内 MHV抗原，从而作出诊断。酶联免疫吸附试验是比较敏感的用于MHV检测的血清学方法,而免疫粘连血凝试验因其简单、重复性好，在一般单位得到广泛的应用。在MHV 检测中应注意使用多价抗原来提高检出率。 6. 预防 MHV感染后，小鼠的体液免疫应答有时非常弱，导致血清学检查阴性。因此无MHV鼠群的建立应坚持血清学方法、剖腹产技术及严格的饲养管理相结合的办法，反复操作，才能清除MHV的存在。 五、乳鼠流行性腹泻（Epidemic Diarrhea of Mice，EDIM） 1. 分布 乳鼠流行性腹泻（EDIM）的病原体是小鼠轮状病毒(mouse rotavirus)， 高发于初生15日龄内的小鼠，乳鼠可表现腹泻、发育迟缓、脱水等症状，偶尔死亡。EDIM在世界范围内分布，我国开放饲养的小鼠中本病发病率也很高。 2. 病原 EDIM病毒属呼肠孤病毒科轮状病毒属，为双股RNA病毒,其外壳上具有区别于其它轮状病毒的特异性抗原。EDIM病毒对热敏感，pH3～9条件下稳定，无血凝素，对乙醚、氯仿、脱氧胆酸盐和胰酶有抵抗力。EDIM病毒不能在鸡胚中生长，也不能在体外细胞培养中传代。 3. 流行病学 小鼠是EDIM病毒的唯一自然宿主，小鼠对本病的易感程度随日龄的增长及免疫力的提高而下降，一般15日龄内的小鼠最为易感。C3H对其敏感，而C57BL则具有相对的抵抗力。本病通过消化道和呼吸道传播，是一种高度接触性传染病。 4. 临床症状 EDIM主要高发于第一胎15日龄以内的乳鼠。乳鼠感染后早期腹泻、脱水、消化不良,皮肤皱缩，肩背皮肤上有干燥白色痂皮，有时皮肤发绀，透过腹壁可看到胃内充满白色乳汁，后躯粘满黄色稀便。后期粪便变干而阻塞肠道，甚至引起直肠嵌塞而死亡。乳鼠可正常吃奶，但因消化不良而积于胃中。轻型病例，2～5天可自行康复。成年小鼠呈隐性感染并不断向外排毒。 5. 病理 解剖可见病鼠消瘦，小肠膨胀，肠腔内充满大量黄色粘液样物质，肠壁菲薄，大肠内无成形粪便。组织学可见小肠绒毛上皮细胞大量空泡化，空泡内偶见圆形嗜酸性包涵体。绒毛上端增粗，固有层内淋巴管扩张，粘膜下层轻度水肿。 6. 诊断 根据流行病学、临床症状和病理解剖特点可作出初步诊断。然后，取病料如小鼠小肠内容物进行病毒分离，再接种4～14日龄无菌小鼠，4天后取小肠研磨提纯，电镜下可见典型病毒离子。 也可用血清学方法如免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验检测病毒抗体。由于EDIM病毒不能在细胞培养中生长，可用牛和猴的轮状病毒做抗原检测抗体。 7. 预防 本病的预防应依靠建立无EDIM病毒的小鼠繁殖群，并彻底截断病毒传播途径。 采用剖腹产技术可建立无EDIM病毒的种子群，然后再扩大繁殖。饲养室应安装高效的空气过滤装置，进入饲养室的垫料、饲料、用具等应彻底消毒，以切断传播途径，完全控制本病的流行。 一旦发生本病，应立即淘汰整个鼠群,尸体焚烧。饲养室彻底消毒,重新引种建群。 |
4楼2006-02-25 11:24:52
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六、嗜肺性巴氏杆菌（Pasteurella pneumotropica） 1. 病原 嗜肺性巴氏杆菌可感染小鼠、大鼠、豚鼠和地鼠。本菌革兰氏染色阴性，无运动性,是多形性球状杆菌，菌体两端着色较浓。可生产吲哚、尿素酶、硫化氢，可分解木糖、海藻糖。 2. 流行病学 本菌感染动物后可呈隐性感染，成为动物呼吸道及消化道的常在菌，当动物抵抗力下降、菌体毒力高或细菌数量多时引起动物发病。健康动物通过呼吸道、消化道感染，也可经过外伤及生殖器官感染。 3. 临床症状 嗜肺性巴氏杆菌为条件致病菌，常与其它细菌混合感染，而引起动物发病。如本菌与仙台病毒混合感染可引起致命性肺炎。与肺炎支原体混合感染可引起并发症而使病情复杂化。本菌感染小鼠后，散在发病，表现为呼吸困难，有咕噜咕噜的呼吸音，动物体重减轻，出现结膜炎、眼炎、乳房炎、不孕、流产、皮下脓肿等。 4. 病理 解剖可见肺有散在性脓肿,在裸鼠表现非常显著。也可表现化脓性中耳炎、泪腺炎、子宫炎、淋巴结炎及泌尿系统的化脓性炎症。 5. 诊断 本病的诊断比较容易，取病料进行细菌分离培养，血平皿37℃培养24小时，菌落表面突起，灰白色,不溶血，光滑似露滴状，直径1mm。然后涂片镜检，也可作生化检查或用标准血清做凝聚反应，即可确诊。 6. 预防 本病的预防应依靠建立良好的环境卫生条件。可通过剖腹产建立无巴氏杆菌的小鼠群。 七、泰泽氏菌病（Tyzzer's organism） 本病因 Ernest Tyzzer 首先描述而命名。 病原菌为毛状芽孢杆菌（ Bacillus piliformis）。小鼠、大鼠、豚鼠、兔对本菌均易感。感染后的典型症状为出血坏死性肠炎和弥漫性灶性肝坏死。可给动物造成很大危害。 1. 分布和病原 本病呈世界性分布，动物群一旦感染可导致“全军覆灭”。 本病的病原是毛状芽孢杆菌，革兰氏阴性杆菌，周身鞭毛，有运动性,可形成芽孢,具多形性，专性细胞内寄生，其生长对细胞的选择非常苛刻，无细胞的培养基上不能生长,可通过卵黄囊途径接种鸡胚来增殖。其芽孢在体外可生存数年，在尸体内很易自溶。 2. 流行病学 本病可通过食入被本菌污染的食物经消化道感染。试验证实本菌可垂直传染。 过分拥挤、环境内高温高湿、长途运输、X线照射、 使用皮质类固醇药物等应激因素可促使本病的发生和发展。在免疫学研究中，当动物处于免疫抑制状态时，可引起有本病隐性感染的小鼠爆发本病，从而导致实验失败。 3. 临床症状 小鼠感染后，往往呈隐性感染。当机体免疫力下降时发病。本病的首发症状是出现突然的死亡。其它动物表现为被毛逆立、嗜睡、严重腹泻，粪便呈水样或粘液状。动物脱水，食欲废绝，2～4天死亡。 4. 病理 解剖可见肝脏肿大，表面散布灰白色、黄色圆形坏死灶。小肠内充满黄色液体，肠壁淤血、水肿，回盲结合部有出血、溃疡灶。 病理可见肝细胞发生凝固性坏死和溶解，病灶周围有嗜中性细胞浸润，病灶边缘的肝脏活细胞内可见成束的状似毛发的杆菌。肠上皮细胞坏死脱落，肠壁固有层及粘膜下层组织水肿，有嗜中性细胞和淋巴细胞浸润，上皮细胞内可查到菌体。 5. 诊断 毛状芽孢杆菌不能在人工培养基上生长。本菌的诊断应取病鼠肝脏组织或肠组织作涂片，镜下观察典型的成束、细长的杆菌可确诊。 也可取病料接种经可的松激发的小鼠，观察小鼠的典型病理变化而确诊。 6. 预防 应严格饲养管理，防止饲料污染，加强饲养室的消毒。提高动物体质，防止应激因素。利用无本病的小鼠进行剖腹产手术，建立SPF鼠群。 八、鼠棒状杆菌病（Corynebacterium kutscheri） 本病的自然宿主是小鼠和大鼠，其感染多呈隐性形式，应激条件下可爆发，并导致动物群全部覆灭。 1. 分布和病原 本病的发生呈世界性分布，特别是在常规鼠群中，隐性感染非常普遍。 本病的病原体是库彻氏棒状杆菌，革兰氏染色阳性，呈小棒锤状，无运动性，不形成芽孢。普通培养基或5％血液培养基37℃48小时形成1mm左右的白色菌落，呈突起半球状，半透明，表面光滑不溶血。 2. 流行病学 库彻氏棒状杆菌可经口鼻或皮肤伤口而感染。该菌可在盲肠长期存在，机体抵抗力下降时进入血液而发病。 一些应激因素如强烈照射、手术处理、运输、营养不良等可诱发本病，使隐性带毒的小鼠群出现本病的爆发。 3. 临床症状 隐性感染的小鼠一般不表现临床症状。当发病时多呈急性经过，发病率、死亡率均较高。小鼠消瘦，被毛逆乱，呼吸困难，关节肿大，皮肤发生溃疡脓肿，甚至形成皮下瘘管，肢体可因坏死而脱落，于一周内死亡。慢性经过时，临床症状不明显。 4. 病理解剖 解剖可见肠粘膜出血溃疡，有小脓肿形成，肠系膜淋巴结肿大。库彻氏棒状杆菌可进入血液形成脓毒败血症，经血液循环扩展到各个脏器，在肺、肾、心、肝及淋巴结形成脓肿，呈灰白或黄色结节，内有干酪样渗出物。其它部位可发生皮肤溃疡、化脓性关节炎、腹膜炎病变等。 病理切片可见脓肿周围有巨噬细胞和噬中性细胞浸润，实质细胞发生坏死。 5. 诊断 取病鼠的脓肿组织涂片，观察形态查找致病菌。 取病鼠鼻咽气管分泌物及肾肺的病灶组织进行培养，取可疑菌落作生化鉴定或用抗血清作玻片凝聚试验。结合以上结果即可确诊。在检查可疑病鼠前，可注射可的松诱发动物发病，以提高检出率。 6. 预防 应健全饲养管理制度，切断传播途径，建立无棒状杆菌感染的鼠群，从而排除本病对实验的严重干扰。 九、体内寄生虫 1. 弓形虫（Toxoplasma gondii） 弓形虫又称刚第弓形体，是一种人畜共患的寄生虫，国家实验动物微生物等级标准中被列为一级实验动物应排除的病原体。小鼠是其主要中间宿主，猫是终末宿主。该虫主要寄生在猫的肠上皮细胞和小鼠各种器官的细胞内。健康小鼠、大鼠、豚鼠吞噬猫体内产生的卵囊而被感染，成为其中间宿主。人、羊、狗、牛等也可感染刚第弓形体而成为其中间宿主。感染后的小鼠会严重干扰实验结果,如T、B淋巴细胞免疫功能长期抑制。 刚第弓形体的生活史比较复杂。中间宿主吞噬卵囊后，卵囊在肠内分解，释放出弓形体原虫，原虫进入宿主细胞内，进行无性生殖，成速殖子，快速繁殖。或形成有包囊的缓殖子，在宿主细胞内缓慢增殖。宿主细胞破裂后释放出速殖子和组织包囊（含缓殖子）。终末宿主吞噬中间宿主排出的速殖子和组织包囊（含缓殖子）及终末宿主排出的卵囊后，肠内酶溶解包囊壁，释放原虫。这些原虫进入肠上皮细胞，形成配子，进行有性繁殖，受精后形成卵囊，并随着宿主细胞的破裂而排出体外。 刚第弓形体的卵囊对低温、干燥和化学消毒剂有很强的抵抗力。刚第弓形体可经胎盘垂直感染。 小鼠感染刚第弓形体后，因其毒力、数量、感染途径的不同而呈隐性感染或急性发病。发病小鼠的肠粘膜、眼、心、肾上腺、脾、脑、肺、肝、肌肉等组织发生坏死。重症病例可死亡，轻症病例可自然康复。 本病的诊断可采用直接涂片法和饱和盐水浮集法检查弓形体的速殖子、包囊。对于终末宿主则检查其卵囊。也可采用取病料组织液动物接种，再查找其速殖子、包囊或卵囊。同时可用间接血凝法等血清学方法检测抗原来确诊。 本病的预防措施有严格隔离小鼠饲养区,切断与其它饲养区特别是猫饲养区的联系,工作人员不准养猫。进入饲养区的用具应严格高压消毒或照射灭菌。 2. 蠕虫 小鼠体内的蠕虫主要有四翼无刺线虫（Aspiculuris tetraptera）、隐匿管状线虫（Syphacia sp、）、短膜壳绦虫（Hymenolepis sp、）等。 这三种寄生虫呈世界性分布，在野鼠和普通鼠群中感染很普遍，且常前二者或三者混合感染。短膜壳绦虫为人畜共患病，对人有较强的致病性。 隐匿管状线虫和四翼无刺线虫是蛲虫。宿主吞噬卵后，在小肠孵化，幼虫在肠内寄生，并经一段时间后成熟，隐匿管状线虫排卵于肛周区，四翼无刺线虫排卵于肠内。前者生活史为12～15天，后者为22～27天。短膜壳绦虫可有中间宿主，中间宿主为节肢动物，也可呈直接型生活史，此时其整个生活史需20～30天。 感染蠕虫的小鼠表现贪食，发育迟缓，被毛无光泽，繁殖鼠生产力低，甚至出现吃仔现象。严重感染可引起肠套叠，肠炎，直肠脱出，肝肉芽肿。 本病的诊断可用饱和盐水漂浮法、沉淀集卵法等方法检查虫卵，也可解剖小鼠从肠道内容物中检查虫体。 预防蠕虫感染必须严格饲养管理的各个环节，严防野鼠进入饲养区，对于可能被野鼠污染的物品应立即淘汰或重新处理后再使用。 十、体外寄生虫（Ectoparasite） 1. 分布及病原 小鼠体外寄生虫常见的有螨、蚤、虱等。其在普通鼠群中很常见，呈世界范围内分布。当前随着动物质量的提高，小鼠饲养环境与外界施行隔离控制，使得需在宿主体外完成部分生活史的虱蚤的感染机会大大减少，而螨成为最主要的体外寄生虫，特别是以下几个需在小鼠体内完成全部生活史的种类：鼠肉螨、疮螨、蝇疥螨、鼠癣螨等。 螨为节肢类寄生生物，生活于小鼠身上的螨有上千种，其生活史各不相同。如其中的疥螨一般经过卵、幼虫、稚虫、成虫四个发育阶段，从卵到成虫约需2～3周的时间。 2. 流行病学 小鼠体外寄生虫可经直接接触传染，健康鼠接触病鼠及其污染物时被感染。 3. 临床症状 患鼠因寄生虫种类的不同而症状不同，一般可出现被毛粗乱、烦躁不安、消瘦、发育迟缓、种鼠生产力下降、仔鼠成活率低等症状，感染严重部位可脱毛、结痂、瘙痒、溃疡或发生皮炎。 4. 诊断 取病鼠的被毛、皮屑等病料，置于载玻片上，镜检查找虫体或虫卵，即可确诊。近来在国家标准《实验动物体外寄生虫检验方法》中推荐使用透明胶纸粘取法，快速、简便、检出率高。 5. 预防 预防措施有增加垫料更换次数，对垫料进行高温、高压消毒后再使用。对饲养室及其内器具及时消毒，并搞好卫生。利用药浴法净化成年鼠，然后用剖腹产技术建立无寄生虫的鼠群。 |
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