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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】真核载体能否在原核细胞内表达
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hui_student

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】真核载体能否在原核细胞内表达

如题，最近再做真核载体构建与表达，连接好的真核表达载体能在大肠杆菌中表达么？因为后续要做WB，需要相应抗体，蛋白抗原的获取应该怎么大量得到？望各位前辈指教！
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一路前行！
1楼 2010-03-30 15:49:12
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anjw_00

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 2010-03-30 16:19
用质粒做载体不就可以在E coli 中表达了么

貌似将Ecoli 大规模培养，然后提取出蛋白就可以做WB了

这关键还是看你做什么蛋白的表达，然后就有不同的提取方法，应该有相关的文献可以查到吧
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一切不以下雪为目的的大风和降温都是耍流氓
2楼2010-03-30 15:58:25
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hui_student

银虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2): 2010-03-30 16:19
我现在重组的是真核表达质粒，目的是转染Hela细胞，然后裂解Hela细胞做WB，现在的问题是检测蛋白表达时候要用到一抗。就需要免疫小鼠制备多抗，我想问的是我的真核重组质粒能否在大肠杆菌中大量表达我的目的蛋白？ 真核载体和原核载体的区别主要有哪些？
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一路前行！
3楼2010-03-30 16:06:58
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-30 16:19
真核和原核的启动子不同，识别不了。真核的不能表达
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4楼2010-03-30 16:10:33
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w.king124

金虫 (正式写手)
★
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应该需要构建原核表达载体吧
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5楼2010-03-30 16:55:43
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-30 22:32
不太熟悉，只能给个提示，穿梭质粒。
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6楼2010-03-30 16:56:31
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-30 22:32
应该不可以，即使是穿梭载体，也只能在大肠杆菌中复制，而不能表达。
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Thank-you，so-blue.
7楼2010-03-30 17:12:41
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hui_student

银虫 (小有名气)
谢谢各位指教了！已经明了了。看来我必须的重新连个原核载体了。谢谢各位了
！
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一路前行！
8楼2010-03-30 22:21:59
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