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【求助/交流】western blot组织中提取蛋白
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| 做wb时，要从脑组织中提取蛋白，用什么裂解液，需不需要加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂 |
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3楼2010-03-30 16:38:58
hui_student
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 帖子: 89
- 在线: 15.1小时
- 虫号: 972612
- 注册: 2010-03-16
- 性别: GG
- 专业: 疫苗和佐剂研究/接种/免疫
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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组织蛋白提取方法很多，给你说一种，你看合适不合适，根据自己的情况选择。 匀浆: 适用于机体软组织破碎。 操作：①用组织剪或手术刀迅速将清洗的组织分离成适宜的小块，如1平方厘米 ②每体积湿重组织通常加3-5倍体积的预冷的匀浆缓冲液致匀浆容器内 ③电力驱动的玻璃匀浆器以500-1500r/min的速度，匀浆3-6次，每次5-10秒；手动玻璃匀浆器匀浆10-20次；刀片式组织破碎匀浆器和内切式组织匀浆器以1000-3000r/min的速度，高速匀浆3次，每次20-30秒。 其中手动玻璃匀浆器更长用于培养细胞和脑组织等的匀浆。注意保持低温。缓冲液中包含多种蛋白酶抑制剂，要不提的蛋白量就有可能被降解，影响你的蛋白产量了。 |
2楼2010-03-30 14:55:12