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caike6326

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】E.coli 电转化已有5人参与

请教一下,E.coli 电转化的条件是什么,我用2500KV,25uF,200欧姆,2mm电转化杯,好像效率很低啊。是不是和电转化仪的牌子有关系,不同的厂家的,条件不一样啊。
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silicare

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1949stone(金币+1): 2010-03-30 12:36
和细菌的种类已经感受态的效率有直接关系,通常都需要按照文献来,不过这个感受态制备起来比化学感受态还简单,

所以还是要看文献的
2楼2010-03-30 08:56:35
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caike6326

铁虫 (初入文坛)

我用的是BL21(DE3),大家有用过的吗?
3楼2010-03-30 09:35:22
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沙中清泉

木虫 (正式写手)

电转条件可能需要优化,制备感受态的方法也需要查阅文献
4楼2010-03-30 09:45:10
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rosalie161

金虫 (正式写手)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-08 23:41
Bio-Rad X cell电击转化仪(在 2 . 5 kV / cm, 50μF,720Ω,约 22 . 6 ms条件下放电 )


我的是这样的!
Rosalei.....
5楼2010-03-30 14:27:07
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erosionsdd

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-08 23:42
本帖内容被屏蔽

6楼2010-04-08 21:30:28
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-08 23:42
细菌状态很重要。看一下分子克隆,摇菌过程中测定一下OD值
7楼2010-04-08 21:55:58
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lidanye

金虫 (小有名气)

caike6326(金币+1): 2010-04-14 06:39
听说电转化过程中特别影响转化率的一个小步骤是
在加pulse后应该立即加上培养基,不然的话转化率会急剧下降
8楼2010-04-13 17:53:29
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zrm1983

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是电转化的感受态有问题啊,电转化对盐浓度要求较高,盐浓度大,一般转不出来,你的东西最好是用双蒸水洗,而不是洗脱缓冲液洗,样品2-3微升就可以了
9楼2010-04-17 11:18:27
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zrm1983

银虫 (小有名气)

是不是电转化的感受态有问题啊,电转化对盐浓度要求较高,盐浓度大,一般转不出来,你的东西最好是用双蒸水洗,而不是洗脱缓冲液洗,样品2-3微升就可以了
10楼2010-04-17 11:18:46
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