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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】聚丙烯酰胺凝胶电泳问题
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】聚丙烯酰胺凝胶电泳问题 已有9人参与

各位大侠：
       本人一电泳菜鸟，我用8%聚丙烯酰胺分离PCR产物，用的160V恒压，先开始移动速度挺快的，怎么后来电流越来越小，条带基本不动了
      想问一下这是怎么回事；另外如果恒流的话效果怎么样？求教了！！
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望大家都各有所获！
1楼 2010-03-29 18:58:15
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
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1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
8%应该是非变性胶吧，我感觉160V应该没有问题，但是你说的电流越来越小，我们没有遇到过这种情况，会不会你的缓冲液配错了，你用的是1倍的TBE吗？这个电泳还是要恒压，中间不要变电压，会使条带重影的，小幅度变化影响不大
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2楼2010-03-30 11:10:04
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way2009way6860

金虫 (正式写手)
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1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
是不是你的电泳仪放的不平，有部分漏液，导致缓冲液没有完全浸没金属丝？
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GO,GO,加油!
3楼2010-03-30 11:39:56
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zyzlyl

银虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
是不是你内槽里边的缓冲液太少了，导致不过电？
我觉得你可以注意一下内槽缓冲液的液面是否低于里边的红色背景。
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外面没有别人……
4楼2010-03-30 17:03:28
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bioxiaoqiang

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
哪里有用聚丙烯酰胺凝胶电泳跑PCR产物啊，琼脂糖1%的比较多。前者是跑小片段的。你的问题我估计是产物太大咯，而聚丙烯酰胺凝胶的孔太小了。
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5楼2010-03-31 14:50:41
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木星海

金虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
2楼说的有理，要是缓冲液漏下来了，电泳当然跑不动了额

要是密封没问题，不过你再用恒流的试试看
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我爱小木虫！
6楼2010-03-31 15:44:11
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
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1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
缓冲液漏掉的可能性比较大，这个我也曾经遇到过，后来发现就是这个问题。
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7楼2010-03-31 20:20:06
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
也可能电泳产热温度太高，电阻太大，导致电流越来越小。放冰上试试看
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8楼2010-04-01 08:45:34
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niemingyu

铜虫 (小有名气)
LZ确定电泳仪没故障吗？
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9楼2010-04-01 09:11:14
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niemingyu

铜虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-04 14:59
LZ确定电泳仪没故障吗？  另外不知道你跑的PCR产物是什么，如果是DNA的话，可以换1%或2%琼脂糖跑下看看，80V——100V恒压，时间与电压成负相关
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10楼2010-04-01 09:13:22
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