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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】200bpDNA片段回收效率低
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sunjiutong

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】200bpDNA片段回收效率低

哪位高手帮帮我，200bpDNA片段回收效率太低，怎么办？？？
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所谓梦想，只有醒来才有可能实现
1楼 2010-03-29 09:00:01
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chjvke

铜虫 (初入文坛)
★
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不用吧，我也做200bp的，PCR扩出来后，先检测一下有没有目的带，有的话，跑胶回收，这时胶只用跑两格多一点就可以切胶回收了，用一般的回收试剂盒就行了，最后洗脱液最好是60度预热过的，洗脱这步重复做两次就行了。我就这样回收的，效果很好，很亮
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11楼2010-03-31 12:00:49
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-29 12:55
如果要是只有200bp的片段的话，你可以通过乙醇沉淀的方法回收。
如果需要跑胶回收的话，那就买小片段DNA回收试剂盒吧，效果还是不错的
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-03-29 09:31:52
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-29 12:55
正常的胶回收试剂盒，在第一步buffer中加入三分之一体积的异戊醇，对于小于500和大于2000的片段，可以明显提高产率。另外，需要将最后的ＥＢｂｕｆｆｅｒ温度提高到６５度后直接加在膜上
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3楼2010-03-29 11:11:12
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hui_student

银虫 (小有名气)
★
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你做的PCR体系体系是多大的？可以尝试加大PCR体系，增加扩增产物的量再凝胶回收。至于DNA凝胶回收试剂盒，本人倾向于直接酚/氯仿法抽提PCR产物。只要是回收肯定涉及到损失的问题，这就要看你的操作和试剂盒的选择了。
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一路前行！
4楼2010-03-30 15:24:20
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