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song123

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请高手指点western blot 中细胞裂解到底该怎么裂,我一直裂不好。

western blot 中细胞裂解到底该怎么裂,我一直裂不好。
裂解液是用买的还是自己配置的?
裂解的时候用超声吗?超声多长时间?
裂解多长时间?
蛋白定量的时候多少的吸光度才说明蛋白的量够了?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

song123(金币+1): 2010-04-02 22:26
裂解液可以自己配也可以买,RIPA甚至loading buffer都能裂解。我们实验室买M-PER的
你是裂什么细胞?哺乳动物细胞,就裂解液直接裂解了。细菌、酵母之类的就要超声。超声时间自己把握吧,我看有人冰上30min的
2楼2010-03-26 22:08:55
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zhouyinggyf

金虫 (正式写手)

song123(金币+1): 2010-04-02 22:26
我们实验室使用的买的裂解液RIPA(强),裂解的是动物细胞,不用超声,PBS洗过细胞之后,加裂解液,裂解2min就够了,我们是在冰上裂解的。也有人用超声,加上裂解液后超声十次,每次3秒就够了。
蛋白定量时做个标准曲线,根据你要上的量计算上样体积,如果你提的样品足够,上样又不会溢出来就行了,最少上样量文献上应该有的
3楼2010-04-01 23:16:38
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