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loveedward

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酵母基因组提取的问题。急!!!

我在做酵母基因组提取的时候,用的是蜗牛酶裂解菌体。酚氯仿异戊醇抽提两次后上清仍然是浅褐色的。然后加入异丙醇后放在4度沉淀,会出现沉淀(不知道是不是DNA),离心后沉淀有颜色,就是上面的浅褐色沉淀,而且很硬(我拿出来过,用手捏碎还比较费劲)。不知道是什么东西。大家有没有遇到过这种情况啊?请高手帮忙找找原因。
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-24 18:19
有这种情形的,建议自己配制破菌缓冲液,加入粗粒石英砂涡旋震荡破菌后加TE离心,情况会好的。
2楼2010-03-24 12:56:21
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陈思容

铜虫 (正式写手)

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amisking(金币+3): 2010-03-24 18:19
蜗牛酶破壁效果不是很好,我上学期一直在提真菌的DNA,用蛋白酶K和SDS使蛋白变性!建议用石英砂充分研磨!取上清的时候一定注意不要吸到两相中间的蛋白层!我刚开始做的时候,没注意到,跑胶加样孔总会有蛋白残留
3楼2010-03-24 14:29:23
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loveedward

银虫 (小有名气)

楼上的两位放不方便把QQ告诉我啊,我想具体请教一下。或者加我也可以的,我的QQ:632764231
4楼2010-03-25 16:03:54
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loveedward

银虫 (小有名气)

我是将菌体洗涤后用等量生理盐水重悬后用石英砂研磨的(通过漩涡振荡器)。不知道能不能达到效果。
5楼2010-03-25 16:23:10
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