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julia9981

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何提取外膜蛋白

我有一个蛋白通过一个锚定在外膜上的蛋白展示在大肠杆菌外膜外的,也就是跟培养基接触的那面,我想把这个蛋白从细胞膜上洗下来,请问高手用哪种方法。听说可以用有机试剂例如表面活性剂等,但是不知道具体的方法,那位高手知道的 给指点指点。多谢啊
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gydgs033

金虫 (小有名气)


1949stone(金币+1): 2010-03-28 11:08
加4mmol的蛋白酶抑制剂和TX-100 1%试试
2楼2010-03-28 10:33:38
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405xiaoling

铜虫 (初入文坛)

外膜蛋白的分离

★ ★
1949stone(金币+2): 2010-03-28 11:08
分离外膜蛋白的物理方法需要较高的离心力,一般在100000g左右,如Masuda和Wooldridge的方法。为避免高离心力,一般加入EDTA或洗涤剂如SDS,Triton X-100等将外膜蛋白溶出来。对于你这种只需要提取一种外膜蛋白,要对提取出的外膜蛋白进行SDS-PAGE将蛋白分离。
3楼2010-03-28 11:04:17
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shwjs88

银虫 (小有名气)

加入SDS或Triton X -100的会使目的蛋白变性,提出的蛋白活性是否可以?
4楼2010-04-01 14:38:22
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zhouyinggyf

金虫 (正式写手)

不是有专门提膜蛋白的试剂盒吗,有没有专门提外膜蛋白的试剂盒呀,没有就自己分离出来吧
5楼2010-04-01 23:00:33
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magiccat

木虫 (正式写手)

用差速离心试试
6楼2010-04-01 23:57:13
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