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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助PCR引物设计
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zycly86

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助PCR引物设计

我想克隆苹果中一个基因的四个不同基因剪接变体，四个基因在5 和3 末端都相同，如果克隆的话，我是设计四种不同特异引物分别PCR四种基因好呢？还是根据相同的5 和3 末端设计一个引物，同时PCR好呢？ 请大家指点
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1楼 2010-03-22 08:36:27
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mxx86

金虫 (职业作家)

快乐家族--心飞
★
zycly86(金币+1):谢谢参与
针对不同的基因应该用不同的引物
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慢慢走过 蓦然回首 才发现大家都走丢了 人生就是这样吗
2楼2010-03-22 09:03:25
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zycly86

铜虫 (小有名气)
1949stone:可以的 谁说不行？ 2010-03-22 09:19
引用回帖:
Originally posted by mxx86 at 2010-03-22 09:03:25:
针对不同的基因应该用不同的引物

设计一个引物，PCR，克隆，然后测序得到三种序列为什么不行呢
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3楼2010-03-22 09:05:26
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delete8080

金虫 (正式写手)
★
zycly86(金币+1):谢谢参与
也可以一个进行PCR，之后跑胶，分离
避免了引物的设计
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4楼2010-03-22 09:07:19
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zycly86

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by delete8080 at 2010-03-22 09:07:19:
也可以一个进行PCR，之后跑胶，分离
避免了引物的设计

那到底哪种方法好呢？
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5楼2010-03-22 09:11:44
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
★
zycly86(金币+1):谢谢参与
都设计，不就多设计一对嘛，合成引物又不贵，你可以试试
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
6楼2010-03-22 10:11:14
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
zycly86(金币+1):谢谢参与
如果你四种不同的基因剪接变体片段大小有些差别的话，可以只设计一对引物的。

然后切胶回收不同大小的就行了。

要是没有差别的话，只设计一条引物也行，后续麻烦一点。

你得多挑克隆做酶切，然后分出你的四种基因剪接变体。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2010-03-22 10:18:58
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zycly86

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-03-22 10:18:58:
如果你四种不同的基因剪接变体片段大小有些差别的话，可以只设计一对引物的。

然后切胶回收不同大小的就行了。

要是没有差别的话，只设计一条引物也行，后续麻烦一点。

你得多挑克隆做酶切，然后分出你的 ...

最短的两条长度只相差40个bp, 电泳可以分来吗
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8楼2010-03-22 10:31:00
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
zycly86(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by zycly86 at 2010-03-22 11:31:00:

最短的两条长度只相差40个bp, 电泳可以分来吗

2.5%的胶，时间跑长点
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-03-22 11:16:09
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