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yudbs

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】苯酚-硫酸比色法相关问题

有没有知道“苯酚-硫酸比色法”的步骤和溶液配置方法的,我查不到,大家要是有详细的实验步骤发给我一下,感激不尽!谢谢!我的邮箱:yudbs@163.com
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康博

木虫 (正式写手)

呆虫虫。。。


yudbs(金币+1):谢谢参与
yudbs(金币+3): 2010-03-20 09:22
酚-硫酸法测定总糖



[原理]

     多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

[试剂]

1. 浓硫酸:分析纯,95.5%

2. 80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。

3. 6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配)

4. 标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。

5. 15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

6. 5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

8. 6mol/L 盐酸

[操作]

     1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。

     2.样品含量测定:

     ①取样品1克(湿样)加1ml 15%TCA溶液研磨,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液于10毫升离心管中,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液,重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意:总的溶液不要超出10毫升。(既不要超出离心管的容量)。

     ②离心,转速3000转/分钟,共三次。第一次15分钟,取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。(测肝胰腺样品时,每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。)

  ③水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀,在96℃水浴锅中水浴2小时。

  ④定容取样。水浴后,用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液,以蒸馏补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。

[注意]

     测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如:小于0.1之下可以考虑取样品时取2克,仍取0.2ml样品液,如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。

希望对你有帮助!
..............................
2楼2010-03-19 11:10:00
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yudbs(金币+1):谢谢参与
3楼2010-03-19 14:00:59
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zwxiaowei

木虫 (正式写手)


yudbs(金币+1):谢谢参与
yudbs(金币+1): 2010-03-20 09:22
推荐给楼主一本书吧...糖复合物生化研究技术(第二版),浙大出版,张惟杰 编。
4楼2010-03-19 19:08:10
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洒脱ing

木虫 (正式写手)


yudbs(金币+1):谢谢参与
yudbs(金币+1): 2010-03-20 09:22
查篇硕士论文吧,里面有的。其实,溶液很好配制的。但是,测定吸光度时,要保持几个梯度的操作要一样的~~
5楼2010-03-19 19:28:30
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yudbs

金虫 (正式写手)

谢谢大家,呵呵,挺有用的。
多发paper
6楼2010-03-20 09:23:08
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zysytu

木虫 (正式写手)


yudbs(金币+1):谢谢参与
苯酚硫酸法是测总糖的 还挺好用的 要用葡萄糖做标准曲线
7楼2010-03-21 09:28:24
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