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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】HPLC峰分不开
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liqian431

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HPLC峰分不开

waters1525  ODS柱   流动相甲醇：水=3：1   流速1ml/min  进样量10uL  样品极性较大的未知生物碱  甲醇做溶剂   柱温25℃   检测波长252nm  出来两个峰 但是挨得比较近 分不开  1：1时也是  采用梯度洗脱重叠的更严重  请问该怎么解决。。。
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1楼 2010-03-19 08:52:41
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dyq214

金虫 (正式写手)
★ ★
佳怡(金币+2):3Q~ 2010-03-20 13:23
liqian431(金币+1): 2010-03-21 11:09
流动相:
A: 10 mM磷酸盐缓冲液pH 6.6
B: (1: 1) 甲醇: 乙腈
梯度: 45-70% B （35 min.内）
尝试下
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2楼2010-03-19 09:00:51
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hanyun3813

木虫 (正式写手)
★
佳怡(金币+1):3Q~ 2010-03-20 13:24
两种物质结构太接近了，是不是对映体？可否考虑下手性柱？
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3楼2010-03-19 09:16:00
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gaochao0326

木虫 (小有名气)
★
佳怡(金币+1):3Q~ 2010-03-20 13:24
改变一下流动相的组成比例，改变其极性试试···
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4楼2010-03-19 09:20:04
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liqian431

金虫 (小有名气)

不知道怎么配

10nM的磷酸盐缓冲液pH6.6怎么配啊  是不是Nacl 1.7g、NaH2PO4 1.74g、Na2HPO4 2.7g ???
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5楼2010-03-19 13:23:17
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
★
佳怡(金币+1):3Q~ 2010-03-20 13:24
建议楼主用10%甲醇看看，如果保留还是较早，可以考虑用纯水或者不加有机相的0.01M-0.05M缓冲盐
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药物合成
6楼2010-03-19 14:36:18
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liqian431

金虫 (小有名气)

不是保留时间的问题

改变流动相比例  两个峰的保留时间都会相应的一致改变  还是挨得比较近  分不开  不过你说的用缓冲盐的可以尝试一下 和二楼的建议差不多 我准备试一下 看效果如何
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7楼2010-03-19 16:21:14
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judy127

新虫 (小有名气)
★
佳怡(金币+1):3Q~ 2010-03-20 13:24
你的标准样品不能用纯甲醇配，一般都要用流动相配
你改改这个，然后把甲醇的比例降低
试试
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8楼2010-03-19 17:41:09
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uliya809

木虫 (正式写手)
★
佳怡(金币+1):3Q~ 2010-03-20 13:24
有两种方法可以试一下，一是降低有机相比例，二就是你物质的极性是不是很强，可以改正相柱试一下
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9楼2010-03-20 09:19:02
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snowmail2000

金虫 (小有名气)
liqian431(金币+1): 2010-03-21 11:09
还有很多种条件可供优化和选择：1，在此条件下尝试ph4.0和6.5的两个条件-----（1）。
2，看（1）的条件哪个有分开的趋势，进一步调节有机溶剂的组成。
3，上述都尝试过不行，使用乙腈作为有机溶剂。
上述实验，必须在柱效尚可的前提下进行。
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沈阳药科大学药学院
10楼2010-03-21 00:57:36
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