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qingzi8575银虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】DNA银染高灵敏度的方法
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谁知道比较好的DNA银染方法阿，灵敏度高的，最好亲手操作过知道效果 |
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yujiaping1
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qingzi8575(金币+8):谢谢 2010-03-18 10:13
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①固定:将凝胶板(胶已沾于其上)置于ZL冰醋酸溶液(10%)中，轻轻摇荡直至 颜色褪净为止，一般需要25一30分钟; ②漂洗:用ZL蒸馏水漂洗2次，每次5分钟; ③染色:在ZL新配的染色液(0.1%ANg03，3m137%甲醛)中，轻轻摇荡30分钟; ④漂洗:用ZL蒸馏水漂洗，时间不超过10秒; ⑤显影:在ZL显影液中(含无水NaZCO:609，IOmg/mlNaZsZO:400林l，37%甲醛 3ml。提前配制，4℃冰箱中预冷2小时以上)轻轻摇荡，直至出现带纹; ⑥定影:在ZL10%冰醋酸溶液中定影5分钟; ⑦漂洗:用ZL蒸馏水漂洗5分钟; ⑧干胶:室温下自然晾干24小时以上。 这个是染变性胶的，慢点，但背景浅，灵敏度高，但操作要求也高一些 |
3楼2010-03-17 13:01:32
yujiaping1
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qingzi8575(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 2010-03-17 12:35
qingzi8575(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 2010-03-17 12:35
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2.3.1.5 银染 参考(Dinesh et al., 1995)等的银染方法，对聚丙烯酰胺凝胶进行染色。具体操作如下： 1. 清洗。将两块玻璃板分开，将胶滑入去离子水中，清洗一下。 2. 染色。倒掉去离子水，加入0.1%的AgNO3溶液，将整个胶片没过即可(容器底部较平，只需要极少的AgNO3溶液)，放到摇床上，缓慢摇荡10 min即可。 3. 清洗。用大量去离子水快速清洗掉胶表面的AgNO3溶液。 4. 显色。倒掉去离子水，迅速倒入新配的显色液(5 g NaOH，0.1 gNaCO3，2.5 ml 37%的甲醛溶液，定容至250 ml)，迅速放到摇床上摇荡，至条带清晰后用自来水冲净显色液。 5. 用凝胶成像系统拍摄或扫描胶片即可。 该方法是染非变性胶的简便方法，灵敏度一般，我还有一个灵敏度高的，再找找 |
2楼2010-03-17 12:27:55
