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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » 【求助】请教大家一个酶催化的问题
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zeroron

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】请教大家一个酶催化的问题

我做一个酶催化的酯类水解反应。试了NOVOZYM 435等很多商品脂肪酶，蛋白酶，但是都没有催化结果。用的酶量应该还算大大过量（底物浓度非常低，1mM）
结果我用自己培养的细菌，用细菌破碎液来催化水解。结果在破碎液量非常大的时候才有很明显的催化效果。（我5ml体系，测出破碎液加得越多底物转化率就越大，最后我干脆全部用细菌破碎液加上底物和一点有机溶剂来反应）
我感觉我使用了太多的酶（细菌破碎液），这样感觉很奇怪。特别是相对我这个很低的底物浓度，一般的反应不需要很多酶就可以了，不知道大家怎么看这个问题呢？有牛人给我点指导吗？谢谢大家啦！
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1楼 2010-03-16 21:28:39
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pal2004

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zeroron at 2010-03-17 16:10:08:


我试过了435等很多商品酶了，在合理的酶量下都没有明显催化效果。
那我现在这样可以发文章吗?

这个不好说，我倒觉得你可以试试能不能筛到表达针对你的化合物的更高活性酶的菌种（比如诱变）。或者也可以优化下现有菌种的产酶条件。
当然，说起来容易，做起来不简单。
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4楼2010-03-17 17:34:34
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pal2004

木虫 (正式写手)
★
karl2100(金币+1):3Q 2010-03-17 17:52
个人观点，待水解的底物显然不是你所用酶的最适底物，你还是应该再筛选种更合适的酶。
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2楼2010-03-17 13:09:04
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zeroron

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pal2004 at 2010-03-17 13:09:04:
个人观点，待水解的底物显然不是你所用酶的最适底物，你还是应该再筛选种更合适的酶。

我试过了435等很多商品酶了，在合理的酶量下都没有明显催化效果。
那我现在这样可以发文章吗?
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3楼2010-03-17 16:10:08
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zeroron

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pal2004 at 2010-03-17 17:34:34:


这个不好说，我倒觉得你可以试试能不能筛到表达针对你的化合物的更高活性酶的菌种（比如诱变）。或者也可以优化下现有菌种的产酶条件。
当然，说起来容易，做起来不简单。

是啊··我一个硕士做这个，老师不支持，什么条件和帮助没有，感觉不太可能
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5楼2010-03-19 10:11:29
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