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虫虫6527

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌种保存

我的菌液在4°C放了半年,现在摇起来,会有什么问题?这个菌里的质粒可能会有什么变化?
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2): 2010-03-16 12:29
担心会有杂菌,另外没有抗性的菌也活下来了吧,就是说不含质粒的菌也会活下来
2楼2010-03-15 22:21:42
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beisimai895

木虫 (小有名气)

可能会染上别的菌,
3楼2010-03-15 23:12:50
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mayerpaco

铁虫 (小有名气)

4度半年确实长了点,接着做的话有点不保险。
4楼2010-03-15 23:24:40
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sl19840203

木虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2): 2010-03-16 12:29
不知道你的菌株是有什么抗性的,一般的有抗性的培养基时间长了会失效,这样菌液里面可能一些没有抗性的菌也会生长,
5楼2010-03-16 08:35:19
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掬月

新虫 (初入文坛)

★
amisking(金币+1): 2010-03-16 12:30
需要分离再筛选
新手上路
6楼2010-03-16 09:22:45
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虫虫6527

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-15 22:21:42:
担心会有杂菌,另外没有抗性的菌也活下来了吧,就是说不含质粒的菌也会活下来

谢谢~如果我加抗生素重新涂下板筛选出原来的菌,我不知道里面带的质粒会产生什么变化?请指教
7楼2010-03-16 12:13:31
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

不该这样保存的,你到底是要菌还是要质粒?如果要质粒的话当初就应该抽提质粒保存吧,一般不提倡用菌保存质粒的
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
8楼2010-03-16 12:59:20
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虫虫6527

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-03-16 12:59:20:
不该这样保存的,你到底是要菌还是要质粒?如果要质粒的话当初就应该抽提质粒保存吧,一般不提倡用菌保存质粒的

是要质粒,我在—20保存了半年,还可以用吗?
9楼2010-03-16 14:20:27
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qqsvery

木虫 (著名写手)

虫虫6527(金币+2): 2010-03-27 09:43
4°放了半年?!看里面菌落的形态和颜色,如果不是很理想,重新划线分离纯化一遍,然后用有抗生素的培养基再纯化菌种。

你用这个菌种提质粒吗?构建好的质粒最好先转化到克隆宿主(DH5a, XL1-blue等)中,然后抽提质粒,酶切或PCR鉴定,测序验证。最后才转化入表达宿主(BL21(DE3))中进行表达。在表达宿主不适宜保存质粒。你这种情况有可能质粒在表达宿主中丢失,也可能质粒基因整合到宿主基因中,然后经过时间长了,质粒就被宿主菌慢慢淘汰掉了(个人看法)。
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
10楼2010-03-16 14:41:34
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