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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌种保存
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虫虫6527

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌种保存

我的菌液在4°C放了半年，现在摇起来，会有什么问题？这个菌里的质粒可能会有什么变化？
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1楼 2010-03-15 21:50:29
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2): 2010-03-16 12:29
担心会有杂菌，另外没有抗性的菌也活下来了吧，就是说不含质粒的菌也会活下来
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2楼2010-03-15 22:21:42
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beisimai895

木虫 (小有名气)
可能会染上别的菌，
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3楼2010-03-15 23:12:50
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mayerpaco

铁虫 (小有名气)
4度半年确实长了点，接着做的话有点不保险。
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4楼2010-03-15 23:24:40
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sl19840203

木虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2): 2010-03-16 12:29
不知道你的菌株是有什么抗性的，一般的有抗性的培养基时间长了会失效，这样菌液里面可能一些没有抗性的菌也会生长，
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5楼2010-03-16 08:35:19
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掬月

新虫 (初入文坛)
★
amisking(金币+1): 2010-03-16 12:30
需要分离再筛选
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新手上路
6楼2010-03-16 09:22:45
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虫虫6527

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-15 22:21:42:
担心会有杂菌，另外没有抗性的菌也活下来了吧，就是说不含质粒的菌也会活下来

谢谢～如果我加抗生素重新涂下板筛选出原来的菌，我不知道里面带的质粒会产生什么变化？请指教
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7楼2010-03-16 12:13:31
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
不该这样保存的，你到底是要菌还是要质粒？如果要质粒的话当初就应该抽提质粒保存吧，一般不提倡用菌保存质粒的
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
8楼2010-03-16 12:59:20
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虫虫6527

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-03-16 12:59:20:
不该这样保存的，你到底是要菌还是要质粒？如果要质粒的话当初就应该抽提质粒保存吧，一般不提倡用菌保存质粒的

是要质粒，我在—20保存了半年，还可以用吗？
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9楼2010-03-16 14:20:27
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qqsvery

木虫 (著名写手)
虫虫6527(金币+2): 2010-03-27 09:43
4°放了半年？！看里面菌落的形态和颜色，如果不是很理想，重新划线分离纯化一遍，然后用有抗生素的培养基再纯化菌种。

你用这个菌种提质粒吗？构建好的质粒最好先转化到克隆宿主（DH5a, XL1-blue等）中，然后抽提质粒，酶切或PCR鉴定，测序验证。最后才转化入表达宿主（BL21(DE3)）中进行表达。在表达宿主不适宜保存质粒。你这种情况有可能质粒在表达宿主中丢失，也可能质粒基因整合到宿主基因中，然后经过时间长了，质粒就被宿主菌慢慢淘汰掉了（个人看法）。
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谎言和真实在河边洗澡，谎言先洗好，穿走了真实的衣服，真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言，却很难接受赤裸裸的真实。
10楼2010-03-16 14:41:34
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