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【求助/交流】关于酶切
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huangdi07
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[交流]
【求助/交流】关于酶切
已有5人参与
最近做酶切连接时 用pcr验证时有目的条带 分别作单酶切时条带大小也表明连接成功 但是双酶切结果和单酶切一样 没有我连接上的小片段 后来我先用一种酶切 然后回收产物后 再用另一种酶切 可是还是没有切下连接上的小片段 我现在也不知道是否连接上了 请各位大侠帮帮忙
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2010-03-15 19:03:57
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huangdi07
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[quote]Originally posted by
j2
at 2010-03-30 15:12:25:
如果2段差别很大,一般的电泳看不出来也正常吧
如果只是点突变的话,酶切位点还是可能识别的~ [/quo
感谢您的回答 问题是我现在测序出来了 序列是正确的 Hind III酶切位点突变了 但是为什么用Hind III单酶切时 还是可以切开啊
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25楼
2010-04-05 15:18:58
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jack6335
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★
amisking(金币+1): 2010-04-06 08:40
你酶切之前最好测一下序验证,另外,双酶切时buffer一定要选对,使两种酶都保持高的的活性!
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砖石王老三!!!
2楼
2010-03-15 20:49:42
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huangdi07
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我选用的是fermentas的共用酶切体系啊 可是怎么也切不开啊
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3楼
2010-03-15 20:50:58
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susizheng
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huangdi07(金币+1): 2010-03-15 21:25
小片段多大,载体多大?如果二者大小差别很大的话,切下的目的片段会很弱,基本很难看见。另外PCR验证的时候,一定要做一个阴性对照(以清水为模板)。
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Thank-you,so-blue.
4楼
2010-03-15 21:00:51
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