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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞DNA的提取
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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞DNA的提取

最近要做细胞DNA的提取，跑电泳。第一次做，没经验，有些问题要向大家求助下哦！
我是买的试剂，没有用试剂盒。
需要配制的溶液如细胞裂解液、蛋白酶K和一些缓冲液；配制这些溶液和装这些溶液的容量瓶和玻璃试剂瓶该如何处理（用之前），还有离心管、枪头之类的，都需要用DEPC处理不？灭菌的话是湿热灭菌还是要干热灭菌。
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1楼 2010-03-15 11:43:21
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
richenim(金币+1): 2010-03-15 11:48
1949stone(金币+1): 2010-03-15 18:40
DNA比RNA稳定多了
瓶瓶罐罐正常清洗就行了，无需DEPC处理，湿热灭菌
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2楼2010-03-15 11:46:41
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-03-15 11:46:41:
DNA比RNA稳定多了
瓶瓶罐罐正常清洗就行了，无需DEPC处理，湿热灭菌

谢谢啊！
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3楼2010-03-15 11:48:56
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-03-15 11:46:41:
DNA比RNA稳定多了
瓶瓶罐罐正常清洗就行了，无需DEPC处理，湿热灭菌

再请假下，配制好了的细胞裂解液、蛋白酶K、电泳缓冲液需要灭菌后再使用，还是可以直接使用啊？谢谢！
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4楼2010-03-15 21:28:00
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★ ★
richenim(金币+2): 2010-03-15 23:26
amisking(金币+2): 2010-03-19 21:11
提RNA器具才用DEPC处理，提DNA不用，只需用灭菌锅灭菌烘干就行，细胞裂解液、蛋白酶和电泳Buffer都不用灭菌，尤其是蛋白酶，拿去灭菌不失活了吗
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5楼2010-03-15 23:16:39
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2010-03-15 23:16:39:
提RNA器具才用DEPC处理，提DNA不用，只需用灭菌锅灭菌烘干就行，细胞裂解液、蛋白酶和电泳Buffer都不用灭菌，尤其是蛋白酶，拿去灭菌不失活了吗

请问配制蛋白酶K和RNase A 可以用蒸馏水配制吗？还是用其他溶剂配制，一般配成的母液的浓度是多少？
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6楼2010-03-19 16:12:32
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85715623

木虫 (正式写手)
richenim(金币+1): 2010-03-19 20:34
配制蛋白酶K和RNase A 要用双蒸水，一般在50—100μg/ml。
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7楼2010-03-19 17:07:22
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 85715623 at 2010-03-19 17:07:22:
配制蛋白酶K和RNase A 要用双蒸水，一般在50—100μg/ml。

50—100 μg/ml ? 是母液还是最终浓度啊？
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8楼2010-03-19 20:35:21
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