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beisimai895

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
pMD-T是T载体,想要和片段连,片段必须有A尾,有的酶P完会带A尾,有的就不带,你看自己的酶是什么?
11楼2010-03-15 23:10:51
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z320m320

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by biodadiao at 2010-03-15 16:40:53:
应该不会吧,一般AT克隆,只要PCR产物纯化后,16度连接30min就可以了,若实在连不上的话,可以将PCR产物添加dATP反应一会时间,效果会更好。

提醒一下,你的PCR实用的是Taq酶吧,不是pfu吧?

我用的rTaq 应该能加上A,我做过较小的片段700多的,就连上了,就是我这个连不上
12楼2010-03-16 10:39:40
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xxy11

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果目的只是测序,纯化后或直接拿产物测序好了。不必要浪费时间,闲时再好好练练技术
13楼2010-03-16 18:41:10
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是的,听说PCR产物纯化后也可以直接测序,问一下公司看
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
14楼2010-03-16 19:06:30
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z320m320

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by xxy11 at 2010-03-16 18:41:10:
如果目的只是测序,纯化后或直接拿产物测序好了。不必要浪费时间,闲时再好好练练技术

恩,我现在也是这么想的,谢谢
15楼2010-03-19 22:40:18
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z320m320

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-03-16 19:06:30:
是的,听说PCR产物纯化后也可以直接测序,问一下公司看

问过了,也不算太贵,准备送样品过去,谢谢了
16楼2010-03-19 22:41:05
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有些高保真酶p完后3‘端是没有A的,通过加A后才能连接
17楼2010-03-22 17:11:57
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vonsun

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果扩增的产物带A,连T-easy载体16度过夜;如果产物不带A,要么加A后连t-easy载体,要么直接连平末端T载体。
18楼2010-03-22 21:28:24
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
把引物和pcr产物同时给公司测序
19楼2010-03-22 21:59:51
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