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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物连接不上，没法测序
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
pMD-T是T载体，想要和片段连，片段必须有A尾，有的酶P完会带A尾，有的就不带，你看自己的酶是什么？
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11楼2010-03-15 23:10:51
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z320m320

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by biodadiao at 2010-03-15 16:40:53:
应该不会吧，一般AT克隆，只要PCR产物纯化后，16度连接30min就可以了，若实在连不上的话，可以将PCR产物添加dATP反应一会时间，效果会更好。

提醒一下，你的PCR实用的是Taq酶吧，不是pfu吧？

我用的rTaq 应该能加上A，我做过较小的片段700多的，就连上了，就是我这个连不上
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12楼2010-03-16 10:39:40
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xxy11

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果目的只是测序，纯化后或直接拿产物测序好了。不必要浪费时间，闲时再好好练练技术
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13楼2010-03-16 18:41:10
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是的，听说PCR产物纯化后也可以直接测序，问一下公司看
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
14楼2010-03-16 19:06:30
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z320m320

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xxy11 at 2010-03-16 18:41:10:
如果目的只是测序，纯化后或直接拿产物测序好了。不必要浪费时间，闲时再好好练练技术

恩，我现在也是这么想的，谢谢
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15楼2010-03-19 22:40:18
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z320m320

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-03-16 19:06:30:
是的，听说PCR产物纯化后也可以直接测序，问一下公司看

问过了，也不算太贵，准备送样品过去，谢谢了
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16楼2010-03-19 22:41:05
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有些高保真酶p完后3‘端是没有A的，通过加A后才能连接
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17楼2010-03-22 17:11:57
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vonsun

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果扩增的产物带A，连T-easy载体16度过夜；如果产物不带A，要么加A后连t-easy载体,要么直接连平末端T载体。
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18楼2010-03-22 21:28:24
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把引物和pcr产物同时给公司测序
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19楼2010-03-22 21:59:51
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