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cxy3358519

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】引物设计

1 ctcctctctc cgccggcaac cttattggta tcaagaaaaa cttgtcgaaa aatacacagg
   61 gcacaatgtg cggaggcgcc atcctcgcgg agctgatccc gccgacgcgg cgcgtggcgt
   121 cgaagccggt gacagaaggc cacctctggt cggcgagctc caagaaagcc ggcagcggca
   181 gggacaagag gcaccagcac gaatacgccg acgatgactt cgaggccgcc ttcgaggact
   241 tcgacgacga ctttgacgtg catgaagacg acgaggacgg ccacttcgta ttctcgtcca
   301 aatccgcctt gtccccagcc ctgcacgacg ggcgcgcggc gagccagaag aagcagcgcg
   361 ggcgccagtt ccgcggcatc cggcagcggc cctggggcaa gtgggcggcg gagatccgcg
   421 acccgcacaa gggcacccgc gtctggctcg gcaccttcag caccgccgag gacgccgccc
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   601 gaaccgcgcc ggaaacgcag cacccagcac agcccgctct gctgcctcga ggagagagag
   661 agacgcagag gaaggaaggg atcgccgccg tgaagccaga agctacggag tcgttcgacg
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   841 agaggccgag atgcgacgaa gactcgtccg agggcggcag cggctccgcg ctggagctcg
   901 ctgacgagct ggcgttcgac ccgtttgtgc tgctgcagat gccctactcg ggtgggtacg
   961 acgacgactc actggacggc cttttcgccg cagatgaggc cgtgcagcag gacgtgggca
   1021 acggcatgga cggcgtccgc ctgtggagct tcgacgagtt ccccgccgtc gacggttctg
   1081 ttttctgacg tttgcttact acgtactact actattttct gcctggtgga atcatatgtg
   1141 atagtgctgc atgtgtctgc ctgatcgtca gattgtactc cactctggat atttgtgcta
   1201 cgtactcgtc tggtatttcc tactgtgggt caatggttcc tatgaatttg ttcacgtcgg
   1261 cgaaactctg tattgtacgg tcgtgattga tgtgccaaat taaataagcc tgtgaacctg
   1321 gttctatgta tatatggtat cttgattatg
//
上面的就是我的目的cDNA序列，我想扩增ORF全长，但是几个月来一直扩增不出来，不知道是反转录的cDNA不完全的原因还是引物的原因。
PS：S1 第46位5'  CGAAAAATACACAGGGCACA  AT3'
R1  5'  ACAGGCTTATTTAATTTGGCAC 3'第1313位
希望高手们帮我分析一下，感激不尽！

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1楼 2010-03-15 10:06:06

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cxy3358519

新虫 (初入文坛)

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Originally posted by cxy3358519 at 2010-03-15 10:06:06:
1 ctcctctctc cgccggcaac cttattggta tcaagaaaaa cttgtcgaaa aatacacagg
61 gcacaatgtg cggaggcgcc atcctcgcgg agctgatccc gccgacgcgg cgcgtggcgt
121 cgaagccggt gacagaaggc cacctctggt cggcgagc ...

请问一下二步法是什么？