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【求助/交流】免疫荧光的灌注固定等问题求助
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因为课题刚刚确定是做大鼠不同脑区免疫荧光的实验，诚恳请教做过免疫荧光的虫友以下问题，请多多指教 1.若是做冷丙酮固定那么是否还需要用固定液对大鼠进行滴注，不需要的话是否还需要用生理盐水灌注冲去血液。 2.因为要买的抗体是需要冷丙酮固定，冷冻切片的，所以请问冷丙酮是否是100%丙酮在4°C冰箱中预冷一夜便可用，那么做固定的时间是多久？ 3.因为客观原因，我取脑组织后不能马上切片，因冷冻切片机在另一地区，路程需要一天半左右，期间我该如何处理脑组织？（若丙酮固定时间不长是否可以固定后将组织放入5mlEP管统一放入液氮中保存捎去） 4.若可用液氮，带到切片机处可以从液氮中拿出切片吗，是否需要蔗糖溶液的置换和OCT包埋？或者置换溶液是否可用蔗糖溶液还是其他？ 5.切片后是否可以直接进行血清封闭加一抗操作 希望大家多多指教，万分感激~O(∩_∩)O~ |
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