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汕头大学海洋科学接受调剂
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yucheng9255

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】怎么PCR克隆4500bp的DNA长片段

想通过PCR设计引物克隆葡萄基因组DNA的4500bp的长片段,可资料上都写着,PCR克隆一般是2000bp, 4500bp是不是太长了,能PCR出来吗
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yucheng9255

木虫 (著名写手)

希望大家给予帮助
2楼2010-03-11 07:46:18
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
longtaq,首推takara的LA
3楼2010-03-11 08:22:47
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yinsongna

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
支持3楼的  4500的用LA可以的
4楼2010-03-11 08:30:05
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
同意楼上的看法,可以先用takara的LongTaq酶试试,我以前用这个酶P过8000多的片段,但是这个酶的保真性不是很好,错配会很多,建议测序确保准确,祝楼主好运!
5楼2010-03-11 08:45:46
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angel2536

金虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
一般高保真都可以,4500不是很长,pfu高保真就可以
6楼2010-03-11 09:18:59
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yucheng9255

木虫 (著名写手)

谢谢各位虫虫的指点,我试试看
7楼2010-03-11 12:30:22
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
4500克隆也不是很好做,建议选择载体时注意一下,另外连接时间要延长
8楼2010-03-11 12:53:59
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missu

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
貌似PFU扩不了4500吧……
用Takara的Primer STAR,高保真又能扩长片段。
9楼2010-03-11 12:56:08
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yucheng9255

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-11 12:53:59:
4500克隆也不是很好做,建议选择载体时注意一下,另外连接时间要延长

选择载体怎么注意呢?希望指点一下
10楼2010-03-11 13:37:26
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