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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么PCR克隆4500bp的DNA长片段
汕头大学海洋科学接受调剂
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yucheng9255

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】怎么PCR克隆4500bp的DNA长片段

想通过PCR设计引物克隆葡萄基因组DNA的4500bp的长片段，可资料上都写着，PCR克隆一般是2000bp, 4500bp是不是太长了，能PCR出来吗
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1楼 2010-03-10 23:10:20
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
希望大家给予帮助
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2楼2010-03-11 07:46:18
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silicare

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1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
longtaq，首推takara的LA
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3楼2010-03-11 08:22:47
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★
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支持3楼的  4500的用LA可以的
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4楼2010-03-11 08:30:05
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
同意楼上的看法，可以先用takara的LongTaq酶试试，我以前用这个酶P过8000多的片段，但是这个酶的保真性不是很好，错配会很多，建议测序确保准确，祝楼主好运！
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5楼2010-03-11 08:45:46
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angel2536

金虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
一般高保真都可以，4500不是很长，pfu高保真就可以
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6楼2010-03-11 09:18:59
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
谢谢各位虫虫的指点，我试试看
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7楼2010-03-11 12:30:22
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
4500克隆也不是很好做，建议选择载体时注意一下，另外连接时间要延长
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8楼2010-03-11 12:53:59
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missu

金虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 2010-03-11 13:41
貌似PFU扩不了4500吧……
用Takara的Primer STAR，高保真又能扩长片段。
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9楼2010-03-11 12:56:08
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yucheng9255

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-11 12:53:59:
4500克隆也不是很好做，建议选择载体时注意一下，另外连接时间要延长

选择载体怎么注意呢？希望指点一下
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10楼2010-03-11 13:37:26
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