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yujiaping1

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[交流] 【求助/交流】topo vector 克隆只产生白斑

用盒子自带control DNA 连接转染后得到如说明结果，数百菌落，95%蓝斑，5%白斑，
但是实际克隆目的基因时，只产生白斑，没有篮斑，其中白斑中有少量假阳性存在。相同目的基因用PGEMT easy 载体克隆可得到蓝白斑。我已经做过几十次了，每次都是这样的结果。网上搜寻未果，询问很多前辈，答：无蓝斑，原因不知。有高手知道原因么？

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1楼 2010-03-10 18:57:28

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yujiaping1

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引用回帖:

Originally posted by yang0071 at 2010-03-11 11:29:01:
因为加入的目的片段远远大于载体量，载体基本上都和目的片段连接，没有蓝斑很正常；pGEM T easy只所以有蓝斑，说明一小部分载体自连了，从这点上看 topo载体好于pGEM T easy载体
实际操作时只要能连接上，管他啥 ...

貌似载体自连为假阳性，线性载体才是蓝斑，请确认。
试验中无论如何修改体系，即改变DNA和Vector的比例，白色结果不变，只是菌斑的数量变化很大，难道topo线性载体无法转化感受态细胞？
但如何解释对照试验大量蓝斑的存在？