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【求助/交流】关于sepharose CL-4B层析介质的处理
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| 快半年没有处理层析柱了 ，请教高手怎么对层析介质进行处理。用碱能处理么？以多少浓度的碱为宜。或者有别的什么处理方法 对流速方面有什么限制？ |
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洗脱/再生缓冲液: 0.1M 甘氨酸缓冲液 pH 3.0,或0.1M柠檬酸钠缓冲液pH 3.0,或者3M硫氰酸钾 中和缓冲液:1M Tris-HCl,pH 9.0 结合缓冲液:中性条件,推荐 20mM PB pH 7.0 或 50mM Tris-HCl pH 7.0 a) 平衡:填料装柱后,用结合缓冲液洗5-10个柱床体积洗掉乙醇并平衡柱子 b) 上样:将样品上柱,上样流速≤60cm/h c) 清洗:结合缓冲液洗5~10个柱床体积,直至UV洗至基线 d) 洗脱:洗脱缓冲液洗脱,收集洗脱峰,洗脱液立即用中和缓冲液中和到中性 e) 再生:再生缓冲液流洗2~3个柱床体积? f) 保存:先用结合缓冲液 再用20%乙醇分别流洗3~5个柱床体积 层析柱内保留适当体积的20%乙醇,置于+4~8℃保存 |
2楼2010-03-08 18:37:20