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河边

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【交流】新手学液相怎么学？

从没摸过液相，不知道如何下手，想知道从头到尾的过程是怎样？现在刚开始学，大家一人一句，教法还不太一样，有点糊涂了。

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自由的生活

1楼 2010-03-02 12:59:47

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shooseal

木虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
佳怡(金币+4):很详尽，感谢 2010-03-06 10:45

色谱理论学过没有？没学过就先学学色谱理论，基础的就行。（如果有过开放柱分离实验的话，可能理解起来会相对简单一些）
学过理论知识就可以进入仪器操作部分了。推荐先学岛津的仪器，简单（操作软件一般是N2000吧，要不然就麻烦点），也便宜，出故障维修也简单一些。如果身边有老鸟就多请教，没有就多看看操作规程或视频教学什么的（简单的进样，两三天就能搞定），对于目前使用更广的Waters和Agilent，可能稍微麻烦一些，毕竟这两个操作系统稍微复杂一些，当然岛津自己的操作软件也有点麻烦，不过应用好像很少。其他厂家我就没有接触过了。
然后高效液相按操作过程可分为这么几部分：
1、进样前处理：样品溶液的准备、流动相的配置和仪器的开启稳定。样品溶液的准备，如果是化合物那还比较简单，如果是天然产物，那就简直是头疼得要命（处理起来很费劲）。流动相的配置就不多说了，自认为很简单（前提是流动相组成已知），需要注意的是一般除了HPLC级的纯溶剂外，其他的流动相都需要先经0.45um的滤膜过滤方可使用，要不然很损仪器的。仪器的开启稳定，岛津的仪器（一般手动进样）包括设定波长和流速（这里介绍的检测器均指紫外检测器）以及进样口的清洗，Waters和Agilent的仪器（价格比较贵，貌似一般购买时都带上了自动进样器了吧）手动进样貌似是很久以前的事了，怎么搞我都忘的差不多了，就不乱说了，自动进样的话，一般都先建方法和序列，然后放样后等待仪器稳定后采样就可以了。（Waters的仪器可能还有清洗密封圈和进样针的过程或仪器矫正的过程，因为Waters的仪器如果维护不好的话，进样针可能不是很准确）
2进样中，这时候其实是个等待的过程，不过你要关注仪器的状态，主要包括硬件的柱压和图谱上的峰形以及出峰时间，这其实就是在提前对图谱进行前处理（Empower和Agilent Chemstation都有对进样中的图谱进行离线处理的功能）
3图谱的处理，就是对图谱做一些积分上的修改（这就看你对软件的熟练程度，我第一次处理Waters图谱时，一张图谱用了一个多小时）
4.进样结束的后处理，包括色谱柱的清洗和仪器的清洗，如果仪器不是24小时工作的话，一般要求连续进样后清洗柱子和仪器的。
此外，做液相必然会碰到各种问题，包括仪器的故障和软件的故障，这个能力只能靠不断的经验积累和学习，毕竟很多问题，不是一说就能明白的，只有在自己碰到并解决后才能有一个很深刻的体会。这我就不多介绍了。
最后我认为也相当中最难的就数样品的分析方法或者说是样品的色谱条件的建立。这包括流动相（成分的种类和比例，pH值）、色谱柱（C8，C18，CN...及其规格）、检测器的种类，还有是否梯度等等。总之很麻烦。
以上就是我对液相的简单认识，只是个大概，希望对LZ有帮助（不对的地方还望见谅）。
非常同意2楼的话：经验是从失败的经历里提取出来的，别怕出错，用一句俗话就是“胆大心细”