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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR反应，只有总体积不同，为什么一个有结果一个没结果？困惑
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波澜不惊

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR反应，只有总体积不同，为什么一个有结果一个没结果？困惑

同样的引物和条件，同一个PCR仪，唯一不同就是一个是25微升的体系一个是50微升体系，50的就能P出很理想的条带，25的就什么都没有。请高人帮忙分析下是什么原因。
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1楼 2010-02-09 18:35:54
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yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-02-09 22:03
老式的pcr仪不能设置反应体系体积
这个pcr仪的“最”佳反应体积为50ul
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2楼2010-02-09 19:19:49
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同上，确实是如此，还有可能体系准备的时候有误差
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2010-02-09 20:19:09
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mayerpaco

铁虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-02-09 22:03
遇到跟楼主一样的问题，唯一不同的是，我的是50ul 的出不来，25ul 的可以。
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4楼2010-02-09 20:53:55
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-02-09 22:03
PCR体积不一样结果有可能会不一样，因为体积的放大或缩小，加样时的放大或缩小可能会弄出误差
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2010-02-09 21:59:44
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695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
体系有的时候也是个慢慢摸索的过程
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6楼2010-02-10 00:09:28
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spiderboy

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很重要的一个原因是，不同体积导热快慢不同。。小体积液体温度分布会更均匀
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7楼2010-02-10 22:09:36
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yingyingzhu

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是你放大或缩小体积时所出现的问题吧~~~
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施万细胞啊，加油长~~~~~
8楼2010-03-04 20:28:22
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2585165

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到过这种情况 如果你是两管 分别加的 那就很可能出现这种情况 因为你不能保证 两管所加的完全相同 呵呵 不过能扩出来 证明你的基因是没问题的
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哎呀呀，别老说我丑，比起小时候，我这还真算是漂亮了！
9楼2010-03-05 09:12:30
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六妖妖

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加大反应体系是稀释了你的模板。在大体系里面能有好的反应结果，有可能是你的模板本身含有过多的PCR抑制剂。可以试试在模板提取过程中找找原因
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10楼2010-03-06 16:30:21
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