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波澜不惊

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR反应,只有总体积不同,为什么一个有结果一个没结果?困惑

同样的引物和条件,同一个PCR仪,唯一不同就是一个是25微升的体系一个是50微升体系,50的就能P出很理想的条带,25的就什么都没有。请高人帮忙分析下是什么原因。
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yang0071

木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-02-09 22:03
老式的pcr仪不能设置反应体系体积
这个pcr仪的“最”佳反应体积为50ul
2楼2010-02-09 19:19:49
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


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同上,确实是如此,还有可能体系准备的时候有误差
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2010-02-09 20:19:09
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mayerpaco

铁虫 (小有名气)

★ ★
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amisking(金币+1): 2010-02-09 22:03
遇到跟楼主一样的问题,唯一不同的是,我的是50ul 的出不来,25ul 的可以。
4楼2010-02-09 20:53:55
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-02-09 22:03
PCR体积不一样结果有可能会不一样,因为体积的放大或缩小,加样时的放大或缩小可能会弄出误差
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2010-02-09 21:59:44
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695

木虫 (职业作家)


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体系有的时候也是个慢慢摸索的过程
6楼2010-02-10 00:09:28
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spiderboy

金虫 (正式写手)


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很重要的一个原因是,不同体积导热快慢不同。。小体积液体温度分布会更均匀
7楼2010-02-10 22:09:36
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yingyingzhu

铜虫 (初入文坛)


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应该是你放大或缩小体积时所出现的问题吧~~~
施万细胞啊,加油长~~~~~
8楼2010-03-04 20:28:22
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2585165

金虫 (正式写手)


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我也遇到过这种情况 如果你是两管 分别加的 那就很可能出现这种情况 因为你不能保证 两管所加的完全相同 呵呵 不过能扩出来 证明你的基因是没问题的
哎呀呀,别老说我丑,比起小时候,我这还真算是漂亮了!
9楼2010-03-05 09:12:30
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六妖妖

金虫 (正式写手)


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加大反应体系是稀释了你的模板。在大体系里面能有好的反应结果,有可能是你的模板本身含有过多的PCR抑制剂。可以试试在模板提取过程中找找原因
10楼2010-03-06 16:30:21
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