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laura-zz金虫 (初入文坛)
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胰蛋白酶活性测定： 以苯甲酰L-精氨酸乙酯（BAEE）为底物，用紫外吸收法进行测定。苯甲酰L-精氨酸乙酯在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L-精氨酸（BA）。在胰蛋白酶的催化下，随着酯键的水解，苯甲酰L-精氨酸逐渐增多，反应体系的紫外吸收宜随之相应增加。 取两个光程为1cm的带石英比色杯，分别加入25℃预热过的2.7mL底物溶液。向一只比色杯中加入0.3mL 0.001mol/L HCl，作为空白，校正仪器的253nm处光吸收零点。再在另一比色杯中加入0.3mL待测酶液，立即混匀并计时，每30s读数一次，共计12次。 绘制酶促反应动力学曲线，从曲线上求出反应起始点吸光度随时间的变化率（即初速度）△A253/min。 胰蛋白酶活力单位的定义规定为：以BAEE为底物反应液pH 8.0，25℃，反应体积3.0mL，光径1cm的条件下，测定△A253，每分钟使△A253增加0.001，反应液中所加入的酶量为一个BAEE单位。 |
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2楼2010-02-09 12:22:50
lengbingyu
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laura-zz(金币+57):谢谢。修改就自己来好了 2010-02-10 21:10
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Trypsin activity determination: With benzoyl L-arginine ethyl ester (BAEE) as substrate, the Trypsin activity was determined by ultraviolet absorption method. In ultraviolet rays with the wavelength of 253nm,the absorption rate of BAEE was much lower than that of the-benzoyl L-arginine (BA). With the catalytic effect of the trypsin and the hydrolysis of the ester, by and by, BA increased, and the UV absorption of the reaction system had a corresponding increase. The following is the process of the experiment: First, prepare two 1cm-path lenth-cuvettes with quartz, and add separately 25 ℃ substrate solution 2.7mL which have been preheated. Next, put 0.3mL 0.001mol / L HCl into one cuvette. As a blank, put it at the zero absorption point,that is the 253nm of the calibration Instruments. Then, put 0.3mL DUT enzyme solution into another cuvette, and mix them and timing immediately. Read time every 30s, with a total of 12 times. At last, draw enzymatic reaction kinetic curve. Get the change rate of the UV absorbance over time(ie, initial velocity) △ A253/min. The definition of the Trypsin activity unit is as follow: with BAEE as the substrate reaction solution pH 8.0, 25 ℃, and the reaction volume 3.0mL, at the sime time under the condition of 1cm light length,to measure △ A253, so that △ A253 increased by 0.001per minute, and to add one BAEE unit of the enzyme into the reaction solution. |
3楼2010-02-09 23:01:49
lengbingyu
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4楼2010-02-09 23:03:29
xiaoqihu
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5楼2010-02-09 23:19:31