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sunlk

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA 降解 指点

大家帮我看看这两张图,为什么会有四条带,RNA没有降解吧,另外为什么点样孔残留的有,怎么回事?指导老师出差了,请大家帮忙指点下,还急着做RT-PCR呢,谢谢
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


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点样孔亮说明有蛋白,第一条带是DNA,也就是说DNA提的浓度比RNA高,RNA略有降解,但估计可以用吧
2楼2010-02-02 18:34:36
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sunlk

铜虫 (正式写手)

奥,谢谢前辈,小弟刚做这些东西,不特懂,谢谢你的指导
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3楼2010-02-02 18:36:09
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sunlk

铜虫 (正式写手)

有dna,怎样才能避免呢。还有,从水相中吸取含RNA的液体而后加入无水乙醇,有白色沉淀的是DNA吧,可不可以稍微离心一下,把DNA沉淀下去,在吸取含RNA的上清液,而后在离心,再用乙醇洗
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4楼2010-02-02 18:41:26
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sunlk

铜虫 (正式写手)

有说是蛋白污染的,不过看过文献有报道,EB并不能和蛋白结合后在紫外灯激发出橘红光。
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5楼2010-02-03 08:33:20
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gaozx123

金虫 (小有名气)


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提过RNA之后,可以用DNAaseI消化一下。
6楼2010-02-03 09:20:44
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


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乙醇沉淀是分离不了DNA和RNA的,加点DNase I吧,不过要注意是RNase-free的~
7楼2010-02-03 09:59:19
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jasco

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by sunlk at 2010-02-02 18:41:26:
有dna,怎样才能避免呢。还有,从水相中吸取含RNA的液体而后加入无水乙醇,有白色沉淀的是DNA吧,可不可以稍微离心一下,把DNA沉淀下去,在吸取含RNA的上清液,而后在离心,再用乙醇洗

沉淀是dna+rna,所以这样做是不行的。

你的dna污染太严重,即使用dnase 消化也很难除尽dna

建议重新提取
8楼2010-02-03 10:00:59
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sunlk

铜虫 (正式写手)

我今上午重提了,仍然那样。我用的是trizol法,到底是哪个步骤污染的呀,前辈们
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9楼2010-02-03 13:46:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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吸到红色层了,就污染了DNA了
10楼2010-02-03 14:57:02
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