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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA 降解 指点
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sunlk

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA 降解 指点

大家帮我看看这两张图，为什么会有四条带，RNA没有降解吧，另外为什么点样孔残留的有，怎么回事?指导老师出差了，请大家帮忙指点下，还急着做RT-PCR呢，谢谢
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很给力
1楼 2010-02-02 18:18:37
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
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点样孔亮说明有蛋白，第一条带是DNA，也就是说DNA提的浓度比RNA高，RNA略有降解，但估计可以用吧
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2楼2010-02-02 18:34:36
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sunlk

铜虫 (正式写手)
奥，谢谢前辈，小弟刚做这些东西，不特懂，谢谢你的指导
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很给力
3楼2010-02-02 18:36:09
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sunlk

铜虫 (正式写手)
有dna，怎样才能避免呢。还有，从水相中吸取含RNA的液体而后加入无水乙醇，有白色沉淀的是DNA吧，可不可以稍微离心一下，把DNA沉淀下去，在吸取含RNA的上清液，而后在离心，再用乙醇洗
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很给力
4楼2010-02-02 18:41:26
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sunlk

铜虫 (正式写手)
有说是蛋白污染的，不过看过文献有报道，EB并不能和蛋白结合后在紫外灯激发出橘红光。
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很给力
5楼2010-02-03 08:33:20
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
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提过RNA之后，可以用DNAaseI消化一下。
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6楼2010-02-03 09:20:44
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
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乙醇沉淀是分离不了DNA和RNA的，加点DNase I吧，不过要注意是RNase-free的~
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7楼2010-02-03 09:59:19
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jasco

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by sunlk at 2010-02-02 18:41:26:
有dna，怎样才能避免呢。还有，从水相中吸取含RNA的液体而后加入无水乙醇，有白色沉淀的是DNA吧，可不可以稍微离心一下，把DNA沉淀下去，在吸取含RNA的上清液，而后在离心，再用乙醇洗

沉淀是dna+rna，所以这样做是不行的。

你的dna污染太严重，即使用dnase 消化也很难除尽dna

建议重新提取
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8楼2010-02-03 10:00:59
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sunlk

铜虫 (正式写手)
我今上午重提了，仍然那样。我用的是trizol法，到底是哪个步骤污染的呀，前辈们
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很给力
9楼2010-02-03 13:46:05
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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吸到红色层了，就污染了DNA了
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10楼2010-02-03 14:57:02
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