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紫外法测定脂肪氧化酶活性过程中遇到的一些问题
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实验用紫外分光光度法测定脂肪氧化酶的活性，用234nm处的吸光值表示脂肪氧化酶的活性。 在反应底物亚油酸钠的制备过程中，0.35mg亚油酸（亚油酸含量81.46%，其余成分为硬脂酸、油酸、棕榈酸）+0.35mg吐温-20+4ml脱氧水，再加0.55ml 0.5M氢氧化钠轻轻摇动使溶液变得澄清，但是我在操作过程中采用此法不能使溶液变得澄清，油没有完全反应，还是有油漂浮在溶液表面，而且溶液容易变得浑浊。改用磁力搅拌搅拌大约半个小时也没法使油完全反应，溶液也是浑浊的。改用慢慢滴加氢氧化钠也还是无法使溶液澄清。 我想请问这里的澄清指的是什么状态，是溶液表面完全不含有油状物，溶液像水一样透明干净吗？我在实验中有什么细节需要改善才能使溶液变得澄清？ 最后比色过程是加入2.95ml磷酸缓冲液，30μl酶液和20μl亚油酸钠底物，反应在比色杯中进行，15s记录吸光值一次，30s记录吸光值一次，然后计算出酶活。但是反应要有一个混匀过程，我想请教在比色杯中如何使溶液混匀，还有这个15s的记录时间似乎太短来不及记录数据，要如何控制，或者比色时有别的操作方法。 |
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