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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR扩增问题求助
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wht1211

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增问题求助

小弟用通用引物扩增同一种植物的9个不同栽培品种的基因间区，其中有7个品种能顺利地扩增出来，但另外两个品种无论怎样改变条件都无法扩增，或是条带极其微弱。正反引物所在的保守区我也测出了全部序列，9个品种完全一样。这两个品种模板不存在问题，反应条件也都是一样的。请教各位这两个品种扩不出来应该是什么原因呢？或是通过什么手段可以扩增出另外两个品种呢？
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1楼 2010-02-01 09:09:49
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
一切都是酶啊
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2楼2010-02-01 18:08:41
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-02-01 19:52
模板浓度调整一下，保证能出
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-02-01 18:39:34
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85715623

木虫 (正式写手)
如果别的方面没有问题，看来还在模板上，建议再提一次，或者换个人做一次。
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4楼2010-02-01 22:10:09
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把解链温度稍微延长点。把基因组DNA浓度调到40ng/ul 试试，退货温度为50度看看
赞一下(1人) 回复此楼
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
5楼2010-02-02 16:29:23
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wht1211

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 断弦的琴 at 2010-02-02 16:29:23:
把解链温度稍微延长点。把基因组DNA浓度调到40ng/ul 试试，退货温度为50度看看

谢谢。不过解链温度从高到低时间从长到短都试过了，PCR促进剂也用过，退火温度也试过，但结果还是一样。真是搞不明白呵呵。
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6楼2010-02-02 16:58:22
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