应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药剂学 » 【求助】急！！！葡萄糖凝胶G50层析柱活化
101/1返回列表
查看: 1681  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

zl0921516

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】急！！！葡萄糖凝胶G50层析柱活化

准备分离脂质体和游离药物，没有新的葡聚糖凝胶G50了，只好用以前的，但是流速太慢了，请教一下各位这种情况，怎么办哦？现在都放假了，资源有限，但是实验还要进行，麻烦各位支个招吧！活化葡聚糖凝胶可以不？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-28 18:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫色小飞

银虫 (小有名气)
zl0921516(金币+20): 2010-01-29 10:24
活化的话很麻烦，还得倒出来，装不好你就不要放假了。呵呵。如果是分离效果不好的话，就再生下吧。那个本来就是很慢的。
赞一下 回复此楼
2楼2010-01-28 20:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zl0921516

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 紫色小飞 at 2010-01-28 20:17:19:
活化的话很麻烦，还得倒出来，装不好你就不要放假了。呵呵。如果是分离效果不好的话，就再生下吧。那个本来就是很慢的。

装柱子我倒是有办法，就是不知道怎么活化，麻烦你可以告诉我具体活化的操作吗？你说的再生是什么意思？就是活化吗？我的柱子速度那是相当相当的慢，没办法啊，现在都放假了。
赞一下 回复此楼
3楼2010-01-29 10:28:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinzhiminghao

铁杆木虫 (职业作家)
zl0921516(金币+16): 2010-01-30 11:29
就是将你的树脂洗涤干净，再根据树脂性质酸碱处理
赞一下 回复此楼
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。
4楼2010-01-30 10:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫色小飞

银虫 (小有名气)
zl0921516(金币+30): 2010-01-30 11:29
凝胶色谱柱操作
1、 溶胀
商品凝胶是干燥的颗粒，通常以40~63um的使用最多。凝胶使用前需要在洗脱液中充分溶涨一至数天，如在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温到近沸，则溶涨时间可以缩短到1~2小时。凝胶的溶涨一定要完全，否则会导致色谱柱的不均匀。热溶涨法还可以杀死凝胶中产生的细菌、脱掉凝胶中的气泡。
2、 装柱
由于凝胶的分离是靠筛分作用，所以凝胶的填充要求很高，必须要使整个填充柱非常均匀，否则必须重填。凝胶在装柱前，可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质，并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱，在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。将柱垂直固定，加入少量流动相以排除柱中底端的气泡，在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。柱顶部连接一个漏斗，颈直径约为柱颈的一半，然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液，同时打开色谱柱的毛细管出口，维持适当的流速，凝胶颗粒将逐层水平式上升，在柱中均匀地沉积，直到所需高度位置。最后拆除漏斗，用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面，再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
3、 柱均匀性检查
凝胶色谱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀，在对样品进行分离之前，对色谱柱必须进行是否均匀的检查。由于凝胶在色谱柱中是半透明的，检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯，用肉眼观察柱内是否有“纹路”或气泡。也可向色谱柱内加入有色大分子等，加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围，如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整，即说明色谱柱性能良好；如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
4、 上样
凝胶柱装好后，一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理，才能上样。凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素，总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱，一般在上柱前将样品过滤或离心。样品溶液的浓度应该尽可能的大一些，但如果样品的溶解度与温度有关时，必须将样品适当稀释，并使样品温度与色谱柱的温度一致。当一切都准备好后，这时可打开色谱柱的活塞，让流动相与凝胶床刚好平行，关闭出口。用滴管吸取样品溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中，打开流出口，使样品液渗入凝胶床内。当样品液面恰与凝胶床表面平时，再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁。重复上述操作及此，每一次的关键是既要使样品恰好全部渗入凝胶床，又不致使凝胶床面干燥而发生裂缝。随后可慢慢地逐步加大洗脱剂的量进行洗脱。整个过程一定要仔细，避免破坏凝胶柱的床层。
5、 冲洗
凝胶色谱的流动相一半多采用水或缓冲溶液，少数采用水与一些极性有机溶剂的混合溶液，除此之外，还有个别比较特殊的流动相系统，这要根据溶液分子的性质来决定。加完样品后，可将色谱床与洗脱液贮瓶及收集器相连，设置好一个适宜的流速，就可以定量地分布收集洗脱液。然后根据溶质分子的性质选择光学、化学或生物学的方法进行定性和定量测定。
6、 再生
因为在凝胶色谱中凝胶与溶质分子之间原则上不会发生任何作用，因此在一次分离后用流动相稍加平衡就可以进行下一次的色谱操作。但在实际应用中常有一定的污染物污染凝胶。对已沉积于凝胶床表面的不溶物可把表层凝胶曲调，在适当增补一些新的溶涨胶，并进行重新平衡处理；如果整个柱有微量污染，可用0.5molNaCl溶液洗脱。在通常情况下，一根凝胶柱可使用半年之久。
凝胶柱若经多次使用后，其色泽改变，流速降低，表面有污渍等就要对凝胶进行再生处理。凝胶的再生是指用恰当的方法除去凝胶中的污染物，使其恢复其原来的性质。交联葡萄糖凝胶厂用温热的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液浸泡，用水冲洗到中性；而对于聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶由于遇酸碱不稳定，则常用盐溶液浸泡，然后用水冲到中性。
7、 保存
经常使用的凝胶以湿态保存为主，为了避免凝胶床染菌，可加少许氯仿、苯酚或硝基苯等化学物质，它可以使色谱柱放置几个月至一年。凝胶的干燥应先对凝胶进行浮选，除去细小的颗粒，并用大量水洗，除去盐和污染物，然后逐步增加一春浓度使凝胶收缩，在60~80度干燥，在整个操作过程中的蒸馏水、器皿和房间必须干净。琼脂糖凝胶的干燥操作比较麻烦，并且干燥后还不容易溶张，所以一般仍以湿态保存为主。
这个是我以前在网站上找的，你看下吧 ，第一条应该就是活化了
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-01-30 11:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫色小飞

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1):3Q 2010-01-30 14:12
再生的话要简单些，0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液直接反向冲下柱子，500毫升差不多，再放过来用约100毫升冲下，完了换下水冲个600毫升的，应该可以冲到中性了，                                                                                                                还有要记得，再生的时候一定不要连接检测器。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-01-30 11:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zl0921516

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 紫色小飞 at 2010-01-30 11:39:16:
再生的话要简单些，0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液直接反向冲下柱子，500毫升差不多，再放过来用约100毫升冲下，完了换下水冲个600毫升的，应该可以冲到中性了，                                   ...

谢谢你的建议，但是我的柱子不是拿来检测用的。我已经用温水的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液（38度）浸泡3H以上，但是好像效果还是不是很明显，郁闷老。
赞一下 回复此楼
7楼2010-01-31 22:42:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫色小飞

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zl0921516 at 2010-01-31 22:42:13:


谢谢你的建议，但是我的柱子不是拿来检测用的。我已经用温水的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液（38度）浸泡3H以上，但是好像效果还是不是很明显，郁闷老。

那就不太清楚你的了，我们是用来检测聚合物的，也可以达到分离的目的。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-02-01 22:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zmcch

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1):3Q 2010-02-02 13:43
流速太慢了?慢到多少，G50的流速本来就不高的，我们26mm直径，推荐最高14ml/min。
如果通过碱或者8M尿素再生后，不起效果，可能填料老化了没有办法了
“用温水的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液（38度）浸泡3H以上”
我觉得时间有点长，GE的G50的PH耐受度比较差的
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-02-02 09:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zl0921516

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zmcch at 2010-02-02 09:02:38:
流速太慢了?慢到多少，G50的流速本来就不高的，我们26mm直径，推荐最高14ml/min。
如果通过碱或者8M尿素再生后，不起效果，可能填料老化了没有办法了
“用温水的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液（3 ...

谢谢你的建议，我的流速为14ml/Day ,估计老化老 。换了一根稍微好些的柱子，我换方法了，层析法速度太慢 ，换成微柱离心发，保佑啊，一定要分离出来！
赞一下 回复此楼
10楼2010-02-02 09:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zl0921516 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭