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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】请问高盐洗脱的时候，对于不同的蛋白质其效果差别大么？
汕头大学海洋科学接受调剂
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ashao

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请问高盐洗脱的时候，对于不同的蛋白质其效果差别大么？

谢谢
就是2M的KCl的buffer
洗脱树脂上的蛋白的时候
如果树脂上有不同的蛋白
比如分子量不同、大小不同、疏水性等不同
其洗脱的时候是不是效果也不同？
换句话说
能否实现通过控制buffer（仅浓度，不pH）
来实现目标蛋白的洗脱（富集）？谢谢指教
ps
如果既浓度、又pH是否是实现该解吸呢？谢谢

[ Last edited by ashao on 2010-1-25 at 16:55 ]
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1楼 2010-01-25 16:49:16
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
ashao(金币+1):谢谢参与
ashao(金币+1):谢谢关注 2010-02-05 23:17
富集是不大可能的了，因为上柱之前要的样品体积就不大，洗脱的时候是要收集需要的流分，这个流分也是有体积的，往往还增大了。

不同的蛋白质效果肯定是不同的了，但是有些蛋白质可能疏水性质差不多，这就需要利用分子量之类的性质不同来做进一步纯化了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-01-30 14:12:21
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
ashao(金币+1):谢谢参与
ashao(金币+1):谢谢关注新年快乐 2010-02-11 15:09
离子交换树脂可以用盐浓度梯度达到洗脱的效果。
赞一下(1人) 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
4楼2010-01-29 20:45:04
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ashao

银虫 (著名写手)
小结一下——
对于高盐洗脱，其实质是“对于离子交换树脂来说，其电荷和物质具有电荷吸引的作用；当加入更高例子浓度的盐时，这种电荷作用会被额外加入的盐离子破坏，进而破坏这种吸附，最终实现洗脱物质。”
蛋白质也是一样，因为其多种氨基酸也是有电荷的，并使得总蛋白带有电荷。
本话题中，想讨论的是如果仅仅凭借洗脱时候盐离子的浓度来实现不同蛋白质的先后洗脱。个人认为可行性不大——
因为破坏这种作用，用的是浓度很高的盐离子。即使在破坏电荷的过程中出现一些拐点或者过渡状态，也难以控制哪种蛋白质先后下来，而且只有在蛋白质电荷相差很大的情况下才可能先后下来。——总之，可行性不大，意义也不大。
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-01-30 14:12:21:
富集是不大可能的了，因为上柱之前要的样品体积就不大，洗脱的时候是要收集需要的流分，这个流分也是有体积的，往往还增大了。

不同的蛋白质效果肯定是不同的了，但是有些蛋白质可能疏水性质差不多，这就需要利 ...

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6楼2010-02-11 15:27:05
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