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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】3‘RACE adapter sequence
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elliott2591

金虫 (小有名气)
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Originally posted by hugang2004_2000 at 2010-01-28 00:52:54:

做了这么多RACE，还没见过引物里有加PolyA或者PolyT的哈。做3‘race的时候有了特异引物之后，再用Universal Primer 或者Nested Universal primer就行了。扩出来的片段连到T载体中去测序。我觉得你说每次大小不同 ...

Universal Primer 或者Nested Universal primer你有吗？
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11楼2010-01-28 17:33:16
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
elliott2591(金币+1): 2010-01-29 17:34
引用回帖:
Originally posted by elliott2591 at 2010-01-28 17:33:16:

Universal Primer 或者Nested Universal primer你有吗？

不同的试剂盒所用的接头序列不同，为啥不告诉大家你用的是什么试剂盒呢？楼上已经有人说了这两个引物的序列，没有的话订一下就行了。但如果不是这个试剂盒的话那就另说了。
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12楼2010-01-28 20:51:01
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elliott2591

金虫 (小有名气)

谢谢诸位

老板让买试剂盒了,宝生物的如何？
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13楼2010-01-29 17:25:12
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
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Originally posted by elliott2591 at 2010-01-29 17:25:12:
老板让买试剂盒了,宝生物的如何？

clontech的吧，很好用，我一次性做七八个基因，已经拿到五六个了，盒子还是不错的，尤其5‘RACE，相当好
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14楼2010-01-29 20:12:33
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by elliott2591 at 2010-01-26 22:51:48:

我的主要问题就是，我按照分子克隆上设计的接头引物加poly（T），另一端是自己根据已知序列设计的特异引物，做3‘RACE，但是扩增出来的条带每次大小都不一致，送去测序发现根本就没有poly（A）或poly（T），而且 ...

我给你的是clontech的引物，那里有合成3’RACE的cDNA引物，这个你必须有，然后你做3‘RACE才能成功，如果你买盒子，那盒子里会有
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15楼2010-01-29 20:14:33
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hugang2004_2000 at 2010-01-28 00:52:54:

做了这么多RACE，还没见过引物里有加PolyA或者PolyT的哈。做3‘race的时候有了特异引物之后，再用Universal Primer 或者Nested Universal primer就行了。扩出来的片段连到T载体中去测序。我觉得你说每次大小不同 ...

RACE cDNA中的引物是有poly（T）的，你查一下说明书，引物中包含Poly（T）序列，这是必须的，你以前可能没有注意到，而且这是3’RACE的原理必须的，任何盒子都会有
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16楼2010-01-29 20:16:25
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-01-29 20:16:25:


RACE cDNA中的引物是有poly（T）的，你查一下说明书，引物中包含Poly（T）序列，这是必须的，你以前可能没有注意到，而且这是3’RACE的原理必须的，任何盒子都会有

我知道，但是那是合成cdna用的，不是用来做PCR扩增目的基因的。
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17楼2010-01-29 20:21:50
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