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elliott2591

金虫 (小有名气)

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Originally posted by hugang2004_2000 at 2010-01-28 00:52:54:

做了这么多RACE,还没见过引物里有加PolyA或者PolyT的哈。做3‘race的时候有了特异引物之后,再用Universal Primer 或者Nested Universal primer就行了。扩出来的片段连到T载体中去测序。我觉得你说每次大小不同 ...

Universal Primer 或者Nested Universal primer你有吗?
11楼2010-01-28 17:33:16
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)

elliott2591(金币+1): 2010-01-29 17:34
引用回帖:
Originally posted by elliott2591 at 2010-01-28 17:33:16:

Universal Primer 或者Nested Universal primer你有吗?

不同的试剂盒所用的接头序列不同,为啥不告诉大家你用的是什么试剂盒呢?楼上已经有人说了这两个引物的序列,没有的话订一下就行了。但如果不是这个试剂盒的话那就另说了。
12楼2010-01-28 20:51:01
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elliott2591

金虫 (小有名气)

谢谢诸位

老板让买试剂盒了,宝生物的如何?
13楼2010-01-29 17:25:12
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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Originally posted by elliott2591 at 2010-01-29 17:25:12:
老板让买试剂盒了,宝生物的如何?

clontech的吧,很好用,我一次性做七八个基因,已经拿到五六个了,盒子还是不错的,尤其5‘RACE,相当好
14楼2010-01-29 20:12:33
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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Originally posted by elliott2591 at 2010-01-26 22:51:48:

我的主要问题就是,我按照分子克隆上设计的接头引物加poly(T),另一端是自己根据已知序列设计的特异引物,做3‘RACE,但是扩增出来的条带每次大小都不一致,送去测序发现根本就没有poly(A)或poly(T),而且 ...

我给你的是clontech的引物,那里有合成3’RACE的cDNA引物,这个你必须有,然后你做3‘RACE才能成功,如果你买盒子,那盒子里会有
15楼2010-01-29 20:14:33
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hugang2004_2000 at 2010-01-28 00:52:54:

做了这么多RACE,还没见过引物里有加PolyA或者PolyT的哈。做3‘race的时候有了特异引物之后,再用Universal Primer 或者Nested Universal primer就行了。扩出来的片段连到T载体中去测序。我觉得你说每次大小不同 ...

RACE cDNA中的引物是有poly(T)的,你查一下说明书,引物中包含Poly(T)序列,这是必须的,你以前可能没有注意到,而且这是3’RACE的原理必须的,任何盒子都会有
16楼2010-01-29 20:16:25
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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Originally posted by yujiaping1 at 2010-01-29 20:16:25:


RACE cDNA中的引物是有poly(T)的,你查一下说明书,引物中包含Poly(T)序列,这是必须的,你以前可能没有注意到,而且这是3’RACE的原理必须的,任何盒子都会有

我知道,但是那是合成cdna用的,不是用来做PCR扩增目的基因的。
17楼2010-01-29 20:21:50
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