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【求助/交流】双片段＋载体连接
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| 现在手上有一个片段3.3kb，两端是Pst1和Msc1酶切位点，一个片段0.9kb，两端是Msc1和EcoR1酶切位点，都用相应的酶切过了，其中Msc1切出来的是平末端。想把两个片段的平末端连起来，然后再和Pst1和EcoR1酶切过的载体连起来（载体3.2k），想请教诸位分子克隆方面的高人：我头两个片段的连接要做多久比较合适？DNA添加的比例怎样？做一个小体系的话我的连接产物需不需要纯化一下再和载体做二次的连接？用什么纯化？不纯化的话直接加载体的话体系应该怎么算？ |
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2楼2010-01-24 21:53:23
susizheng
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