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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】求助！关于衍生化HPLC方法测量脂肪酸含量问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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良善

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】求助！关于衍生化HPLC方法测量脂肪酸含量问题

求助！关于衍生化HPLC方法测量脂肪酸含量问题
衍生化法测量脂肪酸的过程中遇到问题如下：我的做法是:量取油酸对照品溶液100μL于5mL 具塞离心试管中，分别精密加入内标溶液50μL，N 2 吹干，精密加入ω-溴代苯乙酮(20 mg/mL)和三乙醇胺(25 mg/mL)各50μL，乙腈300μL，混合摇匀，于100℃加热15min，冷却至室温后， 精密加入 10 mg/mL醋酸溶液75μL，于100℃继续加热5min，N 2吹干，精密加甲醇500μL， 振摇1min，离心(10000 r/min) 10min，取上清液过微孔滤膜后10μL注入高效液相色谱仪。流动相为甲醇:乙腈:H2O   (65∶27∶8); 柱温:25℃; 检测波长:242nm; 体积流量:1.0mL/min
按照以上条件做了四组实验，分别为：空白组，未加油酸和内标；组1，加油酸和内标；组2，加油酸未加内标；组3，加内标未加油酸。色谱图上空白组在23.5分钟左右有一个峰高为5左右的小尖峰，这个小尖峰在另外三组中也都存在，且位置和峰高不变，这个位置和油酸衍生物的出峰时间相近，在油酸左侧形成了一个小肩峰，请问各位高人这个峰可能是什么物质呢？是不是ω-溴代苯乙酮在242nm下的苯环吸收峰呢？ 这个峰对油酸衍生物峰构成的干扰应该如何处理呢？在氮气吹干的时候我使用了30℃水浴，这会不会对油酸的稳定性有影响呢？
希望对衍生化反应了解的高人帮忙啊！ 谢谢！
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1楼 2010-01-24 14:58:09
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catjaja

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
良善(金币+5):非常谢谢您的及时回复 1-24 15:21
干扰现象很常见，出现干扰就要分析找出原因，如果怀疑是油酸不稳定（这个可以通过查阅文献来确定油酸的稳定性如何），如果怀疑是ω-溴代苯乙酮峰（直接进一针ω-溴代苯乙酮看看就可以），另外看看衍生化试剂是否只反映一次（既是不是一次衍生），另外你的脂肪酸原料药纯度如何（这个是我最怀疑的），先找到原因再考虑如何处理，祝你好运
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2楼2010-01-24 15:08:56
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良善

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by catjaja at 2010-1-24 15:08:
干扰现象很常见，出现干扰就要分析找出原因，如果怀疑是油酸不稳定（这个可以通过查阅文献来确定油酸的稳定性如何），如果怀疑是ω-溴代苯乙酮峰（直接进一针ω-溴代苯乙酮看看就可以），另外看看衍生化试剂是否只 ...

1.文献只报道油酸在空气中容易自氧化，我已用氮气吹干，应该可以排除
2.油酸使用的sigma的标品，大于99%，应该可以排除这个
3.衍生化反应是不是只反应一次，这个不太明白，麻烦您给解释一下，谢谢
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3楼2010-01-24 15:19:21
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catjaja

金虫 (著名写手)
这个，我没做过脂肪酸衍生化，但是经常做其他的衍生化，比如赖氨酸有两个氨基，就容易形成2次衍生产物，其它氨基酸是一次，其实没做过脂肪酸我也说不准原因，柱效有时候也可能掩盖肩峰
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4楼2010-01-24 17:00:11
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良善

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by catjaja at 2010-1-24 17:00:
这个，我没做过脂肪酸衍生化，但是经常做其他的衍生化，比如赖氨酸有两个氨基，就容易形成2次衍生产物，其它氨基酸是一次，其实没做过脂肪酸我也说不准原因，柱效有时候也可能掩盖肩峰

还是谢谢了
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5楼2010-01-24 18:51:56
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