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【讨论】造成色谱峰拖尾的原因及解决办法
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造成色谱峰拖尾的原因及解决办法 一、造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因 1.色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷; 2.柱头有污染; 3.样品超载; 4.样品溶剂不合适; 5.柱外效应; 6.化学或二次保留(硅羟基)效应; 7.缓冲容量不足或不合适; 8.重金属污染。 二、如何解决峰形拖尾的问题 A. 与化学有关的拖尾问题 1.流动相中，加入30mM的三乙胺(用于碱性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物)， 未知化合物加醋酸三乙胺; 2.如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺); 3.降低进样量至<1μg。 B. 与色谱柱有关的拖尾问题 1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗;正向柱可用甲醇冲洗; 2.使用保护柱。 C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽 1.进样体积过大，(通常≤25μL); 2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大(最佳连接管应<20cm，内径为0.007”); 3.检测器流通池的体积过大。 |
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