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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR检测克隆菌落的问题
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qianggene

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR检测克隆菌落的问题

我这几天克隆一个只有300bp左右的小片段，连接转化都是按正常步骤做的，涂在Amp的LB平板上也能长出菌落，可就是再用PCR检测时检测不到目的带，请问这是怎么回事？请各位虫友帮忙解答！谢谢啦！
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1楼 2010-01-17 15:59:46
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-17 16:11
那就提取质粒，酶切一下看看。PCR有的时候会出现假阳性或者假阴性。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-01-17 16:01:48
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-17 21:34
不知道你是连接到什么载体上，不好说，长出来的不一定都连进去了
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-01-17 16:27:32
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qianggene

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-1-17 16:27:
不知道你是连接到什么载体上，不好说，长出来的不一定都连进去了

连的pmd18-T,PEASY T3，两种载体都试过了，可是都不行，以前我常用这两种的，不知最近是怎么了，感觉挺怪的！
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4楼2010-01-17 16:53:14
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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1949stone(金币+1,VIP+0): 1-17 21:35
最近一样遇到了相同的问题，做了6次转化，总共挑了150多个菌做菌液pcr都没出现阳性的，现在提质粒看看了。楼主连T的话阳性率应该挺大了，提10份质粒跑电泳看看有差别没。
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Thank-you，so-blue.
5楼2010-01-17 18:55:06
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