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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】FRT位点重组后的大小
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livacin

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】FRT位点重组后的大小

各位高手你们好！
我现在在做基因敲除，利用的是pKD4作为抗性选择标记模板，后期想推断一下FRT位点在FLP重组酶的作用下重组之后，残留的片段的理论值应该是多少啊？我查了很多文献都没有弄清楚这个问题。我的情况如下：同源臂+FRT+kan+FRT+同源臂 大小为1714bp FRT+kan+FRT大小为1496bp 。在《One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products 》Kirill A. Datsenko and Barry L. Wanner 中所说可以残留82-85 这个就比较难理解了。所以在这里请加一下大家。

[ Last edited by livacin on 2010-1-14 at 14:18 ]
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1楼 2010-01-14 14:15:25
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hhwang

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 1-14 20:58
FRT只有40个bp左右，另外的是P1,P2所P出来的同源序列，统称为“疤痕”。
整套系统应该是BW25113，pKD46和pCP20
你的同源片段比较长而已，不要紧的
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2楼2010-01-14 20:56:12
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livacin

铁虫 (正式写手)
这个我通过若干资料查到了，用基因敲除后的检验大小如：我的是1532bp 减去1393bp就是FLP酶重组后的大小了 我实验的东西重组后就是139bp了
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3楼2010-01-15 12:54:29
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