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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】siRNA Transfection
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gagalady

新虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】siRNA Transfection 已有2人参与

虫虫们？
   我将要siRNA 转染，在稀释转染试剂时 需用无血清培养基（serum-free medium），那这个培养基里含有 谷氨酰胺吗 。
  我用的是TransIT-TKO Transfection Reagent, 说明书上说用Opti-MEM 或 RPMI-1640这两种无血清培养基，
  请问高手，那可以用DMEM  这种培养基稀释此转染试剂吗？
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1楼 2010-01-13 14:21:39
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lansha8331

无虫 (小有名气)
推荐您如果使用威格拉斯的转染试剂VigoFect就没这么麻烦了。不仅可以转SiRNA，而且还可以带血清和双抗都不影响，操作也简单，可以不用培养基稀释，直接用生理盐水稀释就行，转染效率还很高。
另外它是非脂质体阳离子类的，比脂质体的那种毒性也小。
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2楼2010-03-18 11:25:48
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gagalady

新虫 (正式写手)

感谢

引用回帖:
Originally posted by lansha8331 at 2010-03-18 11:25:48:
推荐您如果使用威格拉斯的转染试剂VigoFect就没这么麻烦了。不仅可以转SiRNA，而且还可以带血清和双抗都不影响，操作也简单，可以不用培养基稀释，直接用生理盐水稀释就行，转染效率还很高。
另外它是非脂质体阳 ...

要谢谢你  拓宽了我的转染视野    学到不少东西呢  
  你再告诉我这个威格拉斯这个转染试剂   也可以在网上订购吧
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3楼2010-03-18 14:14:25
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lansha8331

无虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gagalady at 2010-03-18 14:14:25:

  要谢谢你  拓宽了我的转染视野    学到不少东西呢  
  你再告诉我这个威格拉斯这个转染试剂   也可以在网上订购吧

是的啊，可以网上订购的，给你一些威格拉斯公司的信息吧：

威格拉斯生物技术（北京）有限公司
主要从事分子生物试剂盒（核酸类，蛋白类，细胞类等种类丰富多样）的研发，生产和销售等。
详见公司网站:http://www.vigorousbio.com/
或展台http://www.bioon.com.cn/company/index.asp?id=88470折扣优惠。
代理或者经销商可以通过以下方式联系：
QQ：1061980739 E-mail：vigorousbio@126.com
电话：010-58941251 010-58941231
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4楼2010-03-18 14:30:18
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hui_student

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我想问下，我现在是用的Lipofecter脂质体转染Hela细胞，转染的是重组的真核表达质粒，说明书上讲要用不含抗生素和谷氨酰胺的DMEM稀释，这其中的谷氨酰胺是什么作用？我们实验室用的RPMI1640，里面已经加了谷氨酰胺，包含此物质对转染影响大么？望前辈赐教！急等中！！！！
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一路前行！
5楼2010-04-12 22:36:08
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gagalady

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hui_student at 2010-04-12 22:36:08:
我想问下，我现在是用的Lipofecter脂质体转染Hela细胞，转染的是重组的真核表达质粒，说明书上讲要用不含抗生素和谷氨酰胺的DMEM稀释，这其中的谷氨酰胺是什么作用？我们实验室用的RPMI1640，里面已经加了谷氨酰胺 ...

L-谷氨酰胺在是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
我转染的时候 用的稀释液是不含谷氨酰胺、不含血清、不含抗生素的培养基
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6楼2010-04-18 09:04:18
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