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seebbs

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】吐血怪异的△△Ct值,高手请进(跪谢了)

实验为考察多个基因在某毒物作用后的表达变化
相对定量SYBR GREEN PCR
结果出现,有几个基因的△△Ct值大于5,甚至大于10
扩增率,内参Ct值没问题
如果这样算下去2^-△△Ct值岂不是要上千上万?好象文献上从来没这么高的,一般都好象在10以下吧。另一个实验实的哥们说,他们也出现过这样情况,直接除个数字normalize它们,然后再算2^-△△Ct值就行了,反正是看个相对量,有点半信半疑。
请高手指点迷津。。。

[ Last edited by seebbs on 2010-1-11 at 11:32 ]
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xplc

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+2,VIP+0): 1-10 20:04
你pcr的 efficiency 确认过了? R2呢?

还有, 引物二聚体的因素排除了么?

最大的可能是二聚体吧?
2楼2010-01-10 13:42:36
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匿名

用户注销 (著名写手)


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3楼2010-01-10 15:45:16
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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看融解曲线有没有问题
以及Ct标准差有多大(最好小于0.5)
起峰会不会太早或者太晚
如果都ok那可能就是这样子了
4楼2010-01-10 16:05:56
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seebbs

铜虫 (小有名气)

非常感谢各位的指导,终究一下,很可能是因为起峰比较晚(36-38),准备再试试
但请教一下,有这么高的数值是合理情况的可能吗?
5楼2010-01-11 11:38:33
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