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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】用IPG预制凝胶确定蛋白质的具体等电点
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叔扬

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】用IPG预制凝胶确定蛋白质的具体等电点

各位同仁，我有一个his-tag融合蛋白质，软件预测pI为6.03。然而无论进行碱性电泳缓冲液的Native-PAGE还是酸性电泳缓冲液的Native-PAGE，都不能在凝胶里看到其条带。
我打算使用伯乐公司的IPG预制胶条（pH 3-10）来检测一下目的蛋白的等电点。然而该胶条的pH梯度不是尺度均一分布的，我该如何具体判断蛋白质的具体的等电点呢？
在这里先问问大家有何关于测蛋白等电点的想法。等到周一我再具体致电询问试剂公司预制胶条的具体刻度问题。
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小子无识
1楼 2010-01-09 19:37:42
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hhwang

木虫 (小有名气)
★
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跑SDS－P跟等电点没有关系
你的胶都没跑出来，说明表达环结有问题
你先解决这个问题再说
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2楼2010-01-10 01:46:54
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叔扬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by hhwang at 2010-1-10 01:46:
跑SDS－P跟等电点没有关系
你的胶都没跑出来，说明表达环结有问题
你先解决这个问题再说

不好意思，你误解了。我的蛋白质绝对表达出来了，并且经过了SDS-PAGE验证。现在讨论的是这个已经大量表达并且已经被纯化出来的蛋白质在Native-PAGE中没有跑出来。
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小子无识
3楼2010-01-12 18:34:10
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
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bio-rad也有线性的IPG gel啊，既然要测等电点，干嘛还用非线性的...
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4楼2010-01-13 10:54:31
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magiccat

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
bio-rad的仪器好像可以测具体的IPG胶条的PH点
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5楼2010-01-13 16:21:21
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guoenwen

金虫 (小有名气)
学习了。
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6楼2010-01-14 21:00:20
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