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xiaorong-er

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】为什么我的引物扩增不出条带

我根据引物设计原则设计了10对引物了,想扩增鸟类的CSCD(半胱亚磺酸脱羧酶)部分序列,根据其他动物(人、小鼠、大鼠、斑马鱼、猕猴)的同源性设计的,但是总扩增不到预期的片段,或者扩增到了进行测序又不对,请高手帮忙设计几对好引物,谢谢!马上就要毕业了,却做不出来,急呀。
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wwyy0818

新虫 (小有名气)


1949stone(金币+1,VIP+0):maybe 1-9 20:08
很明显,引物有问题
2楼2010-01-09 16:19:41
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hhwang

木虫 (小有名气)

引物特异性不好,要找同院序列高的或者保守区域先P
然后在从里面P出目的片断
3楼2010-01-10 01:49:24
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xiaorong-er

金虫 (正式写手)

我是用各种动物的保守区比较找到同源性高的地方进行引物设计的,为什么就是扩增不出,还有引物如果在ncibi里blast得到这对引物的信息是:该引物是很多基因的引物,各个基因其扩增出的片段不一样,这样的引物特异性是不是不好?是不是最好blast的时候只是得到该引物的预测片段等信息,而是很多别的基因的引物为好?
4楼2010-01-10 10:53:47
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xiangchou812

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
其实楼主在四楼分析的已经很清楚了,应该是特异性有问题。
5楼2010-01-11 17:29:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
环境条件问题!建议继续试验!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2010-01-11 18:04:37
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