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The resultant product was gene-cleaned using Nucleogen gene clean kit, ligated in T-vector using Takara Perfect T-cloning kit, and then inserted into DHa E. coli mutant cells (RBC) by overnight incubation (37 C). Transformed cells were selected, grown overnight (37 C) in LB broth and their plasmids were extracted using SolGent Plasmid mini-prep kit, and were later sequenced. The BLAST search program was used to look for nucleotide sequence homology for the 18S ITS (1/4) region for fungi. The sequences obtained were aligned by Clustal W using MEGA version 4 software , and the neighbor-joining tree was generated using same software. Bootstrap replications (1 K) were used for a statistical support for the nodes in the phylogenetic tree. |
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jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
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zap65535(金币-3,VIP+0):机器翻译痕迹明显 1-12 02:26
zap65535(金币-3,VIP+0):机器翻译痕迹明显 1-12 02:26
| 合成的产物使用核酸基因纯化（？）试剂盒纯化（？）基因，用Takara（宝生物？）的“完美T克隆”试剂盒将其连接到T载体上，再将质粒插入到DHa E.coli突变体细胞中并在37℃下过夜。调取转化后的细胞，用LB肉汤培养基养一个晚上（37℃），用SolGent Plasmid mini-prep（微量质粒制备）试剂盒提取质粒并测序。用BLAST软件比对真菌的18 S ITS(1/4)区的核酸序列同源性。用Clustal W using MEGA version 4软件调整获得的序列结果，并用该软件生成一个进化树。利用仿真复制（1kb）进行进化树节点的统计分析。 |
2楼2010-01-08 09:59:22
mirror5582
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xlfdymmm(金币+15,VIP+0):谢谢！ 1-10 20:12
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采用基因纯化试剂盒对最终产物进行基因纯化，使用Takara公司的完全型T克隆试剂盒连接T载体，然后植入DHa型大肠杆菌突变细胞（RBC）中，37摄氏度培养过夜。挑选变异细胞，在LB肉汤培养基中培养过夜（37摄氏度），使用SolGent公司的质粒小量提取试剂盒提取质粒，并最终测序。采用BLAST软件寻找真菌18S ITS（1/4）区域的核苷酸序列同源性。使用软件MEGA version4中的Clustal W进行序列对齐，并且使用相同的软件构件临近结合树。进行1000次自引导复制对系统发育树结点提供统计学帮助。 PS：楼上的在害人~~~  |
3楼2010-01-08 16:33:35
yzhang1986
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4楼2010-01-09 19:59:58
