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【分享】电泳缓冲液 、染料、凝胶上样液等的配制方法
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实验室各种缓冲液的配方 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液 终浓度配制1L溶液 成分 各成分的用量 2mol/L Tris碱 242g 1mol/L 冰乙酸 57.1 ml EDTA （pH＝8.0） 18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）） 水 补足1L 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 54g 445 mmol/L 硼酸盐 27.5g 硼酸 10 mmol/L EDTA 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 水 补足1L 染料 1％溴酚蓝（bromophenol blue） 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide） 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。 凝胶上样液（gel loading solutions） 6×碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 300ul 10N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 18％聚蔗糖（400型） 1.8g 0.15％溴甲酚绿 15mg 0.25％二甲苯青FF 25mg 水 补足到10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 15％聚蔗糖（400型） 1.5g 水 补足到10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.25％溴酚蓝 2.5ml 1％溴酚蓝 0.25％二甲苯青FF 2.5ml 1％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型） 1.5g 水 补足到10ml 6×甘油凝胶上样液（4℃贮存） 成分及 终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 50％甘油 3ml 水 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝 0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 40％聚蔗糖 4g 水 补足到10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.2％溴酚蓝 20mg 0.2％二甲苯青FF 20mg 200 mmol/L EDTA 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 0.1％SDS 100ul 10％ SDS 50％甘油 5ml 水 补足到10ml 0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH(调节pH＝8.0)，并溶于水中，定容至1L。 0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/LMgCl2: 溶解20.3g MgCl2"6H2O于足量的水中，定容到100ml。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套） 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml 1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2 : 1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT: 1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）:50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液 ,水: 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。 DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/L Tris－HCl 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃） 1mmol/L EDTA 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 水 98.8ml Tris缓冲液（Tris-HCl buffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml） pH 8.6 9.0 14 8.8 21 8.6 28.5 8.4 38 8.2 46 8.0 56 7.8 66 7.6 71.3 7.4 76 7.2 资料来源：www.yiqi120.com |
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