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[交流] 【分享】电泳缓冲液、染料、凝胶上样液等的配制方法

实验室各种缓冲液的配方

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液       终浓度配制1L溶液
成分                                        各成分的用量
2mol/L Tris碱                         242g
1mol/L 冰乙酸                         57.1 ml
EDTA （pH＝8.0）                18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0））
水                                              补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱                   54g
445 mmol/L 硼酸盐                   27.5g 硼酸
10 mmol/L EDTA                      20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
水                                              补足1L

染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠                                        300ul 10N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA                                        120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
18％聚蔗糖（400型）                                  1.8g
0.15％溴甲酚绿                                        15mg
0.25％二甲苯青FF                                        25mg
水                                                    补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝                         1.5ml 1％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF                   1.5ml 1％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA                      100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
15％聚蔗糖（400型）                1.5g
水                                  补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度                配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝                      2.5ml 1％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF                   2.5ml 1％二甲苯青FF
15％聚蔗糖（400型）             1.5g
水                               补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度                配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝                                     1.5ml 1％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF                               1.5ml 1％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA                                  100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
50％甘油                                        3ml
水                                              3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝                   1.5ml 1％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF             1.5ml 1％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA                   100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
40％聚蔗糖                      4g
水                               补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝                   20mg
0.2％二甲苯青FF                20mg
200 mmol/L EDTA                4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
0.1％SDS                      100ul 10％ SDS
50％甘油                      5ml
水                            补足到10ml

0.5mol/L EDTA:  配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH(调节pH＝8.0)，并溶于水中，定容至1L。
0.5mol/L EDTA:  配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/LMgCl2: 溶解20.3g MgCl2"6H2O于足量的水中，定容到100ml。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）

10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl:5ml 1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2 : 1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT: 1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）:50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液 ,水: 2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl          1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
1mmol/L EDTA                      200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
水                                        98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积（ml）                      pH
8.6                                                 9.0
14                                                    8.8
21                                                 8.6
28.5                                              8.4
38                                                 8.2
46                                                 8.0
56                                              7.8
66                                                 7.6
71.3                                           7.4
76                                              7.2

资料来源：www.yiqi120.com

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