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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关引物设计的问题
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谁知道

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有关引物设计的问题

大家好，我最近要纯化一个蛋白，打算把我的目的片段插入PET28a质粒中，使其N端带一个His标签，那么在设计引物时是不是应该把目的基因的起始密码子ATG去掉啊？
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每个人一辈子从来都是一个人
1楼 2009-12-31 15:48:22
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tianpingpe

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不用去掉，你保留了his-tag的话，翻译的时候会从载体本身起始密码子开始翻译的，你自己的没有什么影响的
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2楼2009-12-31 15:55:37
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谁知道

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tianpingpe at 2009-12-31 15:55:
不用去掉，你保留了his-tag的话，翻译的时候会从载体本身起始密码子开始翻译的，你自己的没有什么影响的

谢谢，这样表达的蛋白就多了一个蛋氨酸，会不会影响蛋白的结构？
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每个人一辈子从来都是一个人
3楼2009-12-31 16:00:01
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谁知道

铁虫 (小有名气)
如果我上有引物加一个NdeI （CATATG）酶切位点呢，NdeI的后三个碱基就是ATG
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每个人一辈子从来都是一个人
4楼2009-12-31 16:36:55
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
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his-tag留着用来挂柱子，如果影响蛋白的结构的话，纯化蛋白后可以切掉。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-12-31 16:37:55
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